زیست شناسی سلولی و ملکولی میکروبیولوژی
 

کارنامه رتبه 1 و 3 میکروبیولوژی وزارت بهداشت و زمان ثبت نام آزمون وزارت بهداشت

سلام بر دکتر حسین معتمدی  این وبلاگ حمایت قاطع خود را از دکتر معتمدی اعلام میدارد

درصدهاي رتبه 1 میکروب شناسی آزمون کارشناسی ارشد وزارت بهداشت 89 _ 88

کارنامه رتبه 1 رشته میکروب شناسی پزشكي آزمون کارشناسی ارشد وزارت بهداشت 89_88

نام

 

نام خانوادگي

 

نام پدر

 

شماره شناسنامه

 

رشته امتحاني

ميكروب شناسي

سهميه امتحاني

ازاد

نمره

345.00

رتبه در سهميه

1

نمره آخرين فرد پذيرفته شده در سهميه آزاد

206.00

درصد پاسخ به دروس امتحاني

درس اول

60.00

درس دوم

74.81

درس سوم

84.44

درس چهارم

75.56

درس پنجم

93.33

درس ششم

62.22

درس هفتم

83.33

درس هشتم

0.00

درس نهم

0.00

نتيجه نهايي

قبول

دروس امتحاني

تك ياخته -باكتري شناسي -ويروس شناسي -بيوشيمي -ايمني شناسي -قارچ شناسي -زبان عمومي -

 

1

درصدهاي رتبه 3 میکروب شناسی آزمون ارشد وزارت بهداشت 89_88

 

 

کارنامه رتبه 3 میکروب شناسی پزشکی آزمون کارشناسی ارشد وزارت بهداشت 89_88

نام

 

نام خانوادگي

 

نام پدر

 

شماره شناسنامه

 

رشته امتحاني

ميكروب شناسي

سهميه امتحاني

ازاد

نمره

277.25

رتبه در سهميه

3

نمره آخرين فرد پذيرفته شده در سهميه آزاد

206.00

درصد پاسخ به دروس امتحاني

درس اول

74.81

درس دوم

64.44

درس سوم

40.00

درس چهارم

77.78

درس پنجم

84.44

درس ششم

53.33

درس هفتم

35.83

درس هشتم

0.00

درس نهم

0.00

نتيجه نهايي

قبول

دروس امتحاني

باكتري شناسي -تك ياخته شناسي -قارچ شناسي -ويروس شناسي -ايمني شناسي -بيوشيمي -زبان عمومي -

 

1

 

زمان ثبت نام آزمون کارشناسی ارشد وزارت بهداشت سال تحصیلی 90 _ 89

 

 

ثبت نام اولیه آزمون ارشد وزارت بهداشت طبق روال سالهای اخیر معمولا از اسفند ماه آغاز میگردد. شما با عضو شدن در سایت میکروبیولوژی مسجدسلیمان! (www.microbiology1.blogfa.com) میتوانید به محض آغاز ثبت نام این آزمون، خبر آنرا بصورت اس ام اس و ایمیل دریافت نمائید

آشنایی کامل بر آنزیم های کبدیSGOT,SGPT    علایم کلینیکی و ازمایشگاهی عفونت با HIV علایم کمبود اهن

آشنایی کامل بر آنزیم های کبدیSGOT,SGPT    علایم کلینیکی و ازمایشگاهی عفونت با HIV علایم کمبود اهن از دید آزمایشگاهی
 
 
مروری بر انزیمهای کبدی SGOT,SGPT

 

افزايش نسبي SGOT,SGPTسرم ميتواند نوع ضايعه را نشان دهد در سلولهاي كبدي ميزان

 

SGOT بيشتر از SGPT است SGOT در ميتوكندري و سيتوپلاسم وجود دارد در صورتيكه

 

SGPT   فقط در سيتوپلاسم سلول جاي دارد در هپاتيت مزمن افزايش SGPT ممكن

 

است تنها يافته ازمايشگاهي باشد درChronic persistant hepatitis افزايش

 

SGOT,SGPT  جزئي است سطح بيليروبين سرم ممكن است طبيعي بوده

 

يا افزايش كمتري داشته باشد اين حالت بيشتر بعد از هپاتيت حاد B يا

 

NonA  NonB  بوجود ميايد در بيماريهاي مزمن كبدي با يرقان و بدون

 

يرقان اگر SGPT  بيشتر ازSGOT  باشد هپاتيت الكلي وجود دارد

 

و اگر نسبت افزايش SGOT   بيشتر از SGPT باشد احتمالا سيروز

 

يا هپاتيت فعال مزمن وجود دارد .

 

الفا فتو پروتئين يك پروتئين جنيني است كه بعد از تولد از بين ميرود

 

و در افراد مبتلا به سرطان كبد به ميزان زياد ديده ميشود در اين

 

حالت ممكن است سطح SGOT  بالا و SGPT  سرم طبيعي

 

باشد .در سيروز كبدي كه مرحله نهايي بعضي بيماريهاي كبدي است

 

و بيشتر در اثر مصرف الكل بوجود ميايد يافته مهم ازمايشگاهي

 

كاهش البومين سرم است به علت كاهش تعداد سلولهاي فعال كبد.

 

ساير تستهاي بيوشيميايي طبيعي است و در الكتروفورز سرم

 

هيپرگاماگلوبولينمي ديده ميشود .در hepato cellular failure

 

پتاسيم سرم كاهش ميابد و علت ان افزايش الدوسترون است .

 

زيرا كبد يك عضو غير فعال كننده هورمونهاي استروئيدي

 

است .

علایم کلینیکی و ازمایشگاهی عفونت با HIV

بيماران مبتلا به ايدز بعد از 2 تا 6 هفته از مواجه با ويروس دچار تب

 

و خستگي و بثورات جلدي و اسهال و بزرگ شدن غدد لنفاوي شده و حتي

 

بيماري ممكن است به صورت مننزيت ويروسي با سردرد تظاهر نمايد

 

در اين حالت لنفوسيتوز همراه با لنفوسيتهاي اتيپيك بخصوص از نوع

 

پلاسماسيتوئيد ديده ميشود در بيشتر بيماران الودگي به صورت نهفته

 

باقي مانده و بعد از مدتي عفونت با ميكدوبهاي فرصت طلب اغاز

 

ميشود.دربيشتر بيماران هموگلوبين كاهش و بين 9.7 تا 11.7 است

 

و نيز iron   -and TIBC  هر دو كاهش مي يابد در اين افراد

 

تعداد گلبولهاي سفيد كاهش يافته و داراي گرايش به چپ بوده و نوتروفيل ها

 

اغلب دچار HYPOSEgmentationميگردند و به فرم pelger huet ديده

 

ميشود. مونوسيتهاي بزرگ واكوئول دار نيز ممكن است ديده شود .

 

كاهش پلاكت به ميزان كمتر از صد هزار در هر ميلي متر مكعب در

 

3تا 8 درصد از بيماران فاقد علائم و در 30تا 45درصد از بيماران

 

باعلائم گزارش شده است .بيماران مبتلا به ايدز چه با علائم وچه

 

بدون علائم ممكن است تنها تظاهر انها فقط كاهش پلاكت باشد و

 

بيماري بصورت ترومبوسيتوپني ايمونولوژيك بروز نمايد.ميزان

 

كاهش پلاكت در ايدز معمولا بين 40000تا 60000بوده ولي

 

ممكن است با شمارش حدود ده هزار نيز ديده شود.

 

علایم کمبود اهن

هر يك سي سي PACKCELL  يك ميلي گرم اهن دارد . مردها روزانه يك ميلي گرم اهن

 

از دست مي دهند و زنان در طي حاملگي يا شيرد هي 3  ميلي گرم اهن در روز از دست مي دهند .

 

در هر حاملگي جنين 500  ميلي گرم اهن را از مادر ميگيرد  در  مردها كمبود اهن شايع

 

نيست و اگر پيش ايد به معني خون ريزي  دستگاه گوارش است و اگر سن بالاي 50 سال

 

باشد شايد  سرطان هاي دستگاه گوارش باشد .

 

يكي از منابع ذخيره ي اهن macrophage است .

 

در مراحل اوليه ي فقر اهن افزايش پلاكت و وقتي فقر اهن شديد باشد پلاكت كاهش مي يابد.

 

در كم خوني فرد حالت بي خوابي و بي قراري دارد  كسي كه كم خوني فقر اهن دارد سوزش زبان

 

و يك حالت براقيت زبان دارد و ناخن ها شكننده مي شود  و اگر فقر اهن پيشرفته شود ناخن

 

به صورت قاشقي  koilonychias در مي ايد  . يك سوم بيماران بزرگي طحال دارند و اين افراد

 

انحراف اشتها  ( pica) دارند  يعني تمايل به  خاك خواري يا خوردن يخ يا نشاسته  دارند.

 

بعضي از بيماران اختلال در بلع پيدا مي كنند  كه مي گويند در گلوي اينها web پيدا ميشود

 

يعني بافت مخاط مري كلفت مي شود .به اين حالت    Vinson   syndrome   plummer 

 

ميگويند.

هموگلوبین گلوکوزیله HB A1C   و بروسلا  تجزیه ادرار

 هموگلوبین گلوکوزیله HB A1C

ديابت  مليتوس بيماري مزمن سيستميك با اختلال در متابوليسم گلوكز كه عدم كنترل موفق ان

اسيبهاي ميكرووسكولار در چشم و كليه و ماكروواسكولار در سيستم قلبي عروقي را موجب

ميشود .اندازه گيري HB A1C  نقش با اهميتي در كنترل ديابت و كاهش اسيبهاي بافتي

دارد .مقداري از گلوكز موجود در خون به هموگلوبين A باند شده و در طول 120

روز عمر گلبولهاي قرمز در انجا باقي ميماند .هر چه غلظت گلوكز پلاسما بيشتر باشد

گلوكز بيشتري به هموگلوبين باند ميشود .اين تركيب را هموگوبين گليكوزيله گويند .

و اندازه گيري ان مقدار متوسط گلوكز خون در طي 9-6 هفته گذشته كه برابر

با نيم عمر گلبولهاي قرمز است را نشان ميدهد .

ميزان موفقيت درمان ديابت كه به روشهاي مختلف انجام ميشود توسط اين تست

ارزيابي ميگردد. اين موضوع در بيماراني كه قند خون متغير و پر نوسان دارند

اهميت بيشتري دارد.

همبستگي بالايي بين مقدار HB A1C  و متوسط گلوكز خون وجود دارد بطوري

كه افزايش يا كاهش به ميزان يك درصد در مقدارHB A1C افزايش يا كاهش

در حدود 35-30 ميليگرم در متوسط گلوكز خون طي 9-6 هفته گذشته را نشان

خواهد داد .

رژيمهاي كوتاه مدت كه توسط بيمار براي رضايت خود و يا پزشك معالج گرفته ميشود

در مقدار HB A1C  تاثيري نداشته و پزشك را در تصميم گيري دچار اشتباه نخواهد كرد.

اندازه گيري HB A1C  كمك به افرادي است كه بيماري انها جديدا تشخيص داده شده

است و اينكه بدانيم سطح گلوكز خون در شرايط بدون درمان و كنترل قبلي چگونه

بوده است .از اين هموگلوبين در پيش بيني به ابتلا به ديابت در افراد مي توان

كمك گرفت .در افرادي كه HB A1C  طبيعي دارند امكان ابتلا كم و نياز به پيگيري

در سه سال اينده را ندارند .اما در افرادي كه HB A1C   بالا دارند بخصوص در

افراد چاق و در خطر بايد برسي و پيگيري زودتر انجام گيرد .

از اين هموگلوبين در پيگيري و برسي احتمال ابتلا به ديابت در 5 سال اينده در

افرادي كه اختلال در تست تحمل گلوكز دارند يعني گلوكز پلاسما 200-140 ميلي گرم

در صد استفاده ميشود .

مقدار نرمال ان 6-3 درصداز كل هموگلوبين در افراد نرمال را HB A1C تشكيل

ميدهد .در افراد ديابتي هر چه اين مقدار به 6 درصد نزديكتر باشد بيماري بهتر

تحت كنترل بوده است .مطالعات جديد نشان داده است كه اسيبهاي ميكروواسكولار

در كليه و چشم افرادي كه تحت كنترل بوده و HB A1C  كمتر از هفت درصد داشته اند

بندرت اتفاق ميافتد .لذا مقدار 7-5/6 درصد را استاندارد طلائي ذكر كرده اند.

بطور كلي در افراد ديابتي مقدار HB A1C  كمتر از 5/7 درصد را كنترل خوب

و مقدار 9-6/7 درصد را كنترل قابل قبول و مقدار بيشتر از 9 درصد را كنترل ضعيف

ميدانند .

هر عاملي كه موجب كاهش طول عمر گلبولهاي قرمز شود سطح HB A1C را بطور

كاذب كاهش ميدهد .از خون تام بر روي ماده ضد انعقاد EDTA استفاده ميشود و نمونه را

ميتوان يك تا سه روز قبل از تهيه ليزات در يخچال نگهداري كرد .خونگيري در شرايط

ناشتا لازم نيست اما جهت جلوگيري از تداخل اسيدهاي چرب و ليپوپروتئينها در ازمايش

شرايط ناشتا بهتر است



ادرار در حالت طبيعي به رنگ زرد كهربائي و شفاف است وجود تعداد زيادي سلول

 

يا وجود كريستالهاي امورف ان را كدر مينمايد .مصرف بعضي داروها ميتواند

 

رنگ ادرار را تغيير دهد .مثلا داروي متيل دوپا در صودت وجود مواد اكسيد

 

كننده رنگ ادرار را به فرمز مايل به قهوهاي تغيير ميدهد و يا مترونيدازول

 

رنگ ادرار را تيره يا پررنگ يا به رنگ فرمز مايل به فهوه  اي تغيير

 

ميدهد و يا داروي ريفامپين رنگ ادرار را به قرمز نارنجي تغيير ميدهد

 

داروي متوكاربامول رنگ ادرار را به سبز قهوه اي تغيير ميدهد

 

وزن مخصوص ادرار نشاندهنده ي ميزان مواد محلول در ان است

 

ادرار صبحگاهي بايد وزن مخصوص حدود 1.022داشته باشد

 

و پس از مصرف اب فراوان اين عدد بايد به حدود 1.003كاهش

 

يابد .ادراري كه وزن مخصوص ان بالاتر از 1.040باشد به احتمال

 

قوي متعلق به فردي است كه عكس رنگي كليه گرفته و مواد حاجب

 

سنگين وارد ادرار وي شده است و يا اينكه براي گول زدن ازمايشگاه

 

قند يا همان سوكروز به داخل ادرار ريخته است .عدم توانايي كليه

 

در رقيق يا غليظ كردن ادرار نشانه بيماري كليوي يا بي كفايتي

 

هورموني است .

 

محدوده طبيعي PH  ادرار بين 4.8 تا 7.5 است .برخي عفونتهاي

 

ادراري ميتوانند اسيديته ادرار را قليايي كنند و نيز مصرف غذاهاي

 

گياهي موجب قليايي شدن ادرار ميگردند.در صورتي كه PH

 

ادرار زير 4 باشد احتمالا ظرف ادرار به مواد اسيدي الوده بوده

 

است . و اگر بالاي 7.5 باشد ماندن ادرار و تكثير باكتري ها محتمل

 

است و بايد ازمايش تكرار شود .

 

دفع طبيعي پروتئين ادرار 24 ساعته 150-50 ميلي گرم است كه حدود

 

20 درصد ان البومين است حساسيت نوار ادراري براي پروتئين 20-5

 

ميلي گرم در دسي ليتر است .گلوكز در ادرار بطور طبيعي وجود ندارد

 

 

در زنان حامله بطور گذرا ممكن است به مقدار جزئي در ادرار مشاهده

 

شود .وجود مواد شوينده اكسيدان در ظرف ادرار ميتواند موجب نتيجه

 

مثبت كاذب گردد .وزن مخصوص بالا شدت رنگ ايجاد شده را كاهش

 

ميدهد.

 

كتون با سوخت ناقص چربي كه در ديابت يا گرسنگي طولاني يا مصرف

 

بعضي داروها ايجاد ميشود .اسپيرين در اين ازمايش تداخل ميكند.

 

هموگلوبينوري در حالت هموليز داخل عروقي يا بعد از ورزشهاي

 

سنگين و يا در ادرارهاي قليايي ديده ميشود .ميوگلوبينوري در اثر

 

تخريب حاد فيبرهاي عضلاني ايجاد ميشود ميوگلوبين سريعا توسط

 

كليه دفع شده و بصورت رنگدانه هاي قرمز-قهوه اي ديده ميشود.

 

ميزان زياد ميوگلوبين ميتواند موجب از كار افتادن كليه ها و انوري

 

گردد.ميوگلوبين در PH   اسيدي پايدار نيست .جهت نگهداري بايد

 

ادرارخنثي شده و در يخچال قرار داده شود .در ميوگلوبينوري

 

ميزان CPK سرم شديدا افزايش مييابد.

 

بطور طبيعي مقدار كمي اروبيلينوژن در ادرار دفع ميشود

 

افزايش دفع ان در انمي هموليتيك و هپاتيت ديده ميشود .در انسداد

 

صفراوي ميزان ان در ادرار كاهش مييابد .انجام ازمايش حد اكثر

 

تا يك ساعت بعد از جمع اوري ادرار بايد انجام شود چون ممكن است

 

نتيجه منفي كاذب دهد.

 

وجود نيتريت در ادرار دال بر وجود بيش از يك ميليون باكتري در يك

 

ميلي ليتر ادرار است .

 

RBC  در ادرار هيپوتونيك ممكن است به شكل مضرس ديده شود .

 

و نوتروفيلها متورم شده و گرانيولهاي سيتوپلاسمي انها حركت براوني

 

پيدا ميكنند كه به انها سلولهاي گليتر ميگويند .

 

تقريبا50 درصد لكوسيتها پس از 3-2 ساعت ماندن در دماي اتاق از

 

بين ميروند .

 

سلولهاي اپيتليال به تعداد كم در ادرار وجود دارد .دو سوم ابتداي مجاري ادراري

 

را سلولهاي ترانزيشنال كه به شكل مدور يا گلابي است و يك سوم ديگر

 

را سلولهاي سنگفرشي تشكيل ميدهند .اگر سلولهاي ترانزيشنال به تعداد زياد

 

و بطور متوالي ديده شود بايد برسي هاي بيشتري جهت كارسينوما صورت گيرد

 

 

كريستالهاي ادراري

 

كريستالهاي سيستئين بيرنگ و صاف و شش وجهي هستند كه وجه هاي انها با هم

 

نامتساوي است . در اسيد استيك حل نميشود ولي در اسيد كلريدريك و يا محلولهاي

 

قليايي محلولند. كريستالهاي لوسين و تيروزين خيلي بندرت در ادرار ديده ميشوند .وجود انها

 

در ادرار نشان دهنده ضايعه كبدي است .تيروزين بصورت دسته اي از ميله هاي

 

باريك و تيره ظاهر ميشوند .كريستالهاي لوسين بصورت كرات روغني زرد

 

يا قهوه اي ديده ميشوند .

 

كلسيم اگزالات به شكل پاكتي يا بيضوي يا ديسك هاي مقعر الطرفين ديده ميشوند

 

و از گوشه بشكل دمبل ديده ميشوند .كريستالهاي اوريك اسيد بشكل لوزي

 

يا صفحات شش وجهي يا بشكل خوشه هايي شبيه روزت ديده ميشوند .

 

كريستالهاي امونيم بيورات يا همان تورن اپل كريستال به رنگ زرد مات

 

يا قهوه اي تيره با بدنه هاي كروي با برامدگي هاي نامنظم وبه شكل سيب زميني

 

با ريشه هاي نامنظم است .وقتي به اينها سود اضافه شود از انها امونياك ازاد

 

ميشود .

 

كريستالهاي تريپل فسفات بي رنگ و به شكل منشورهايي با اندازه هاي

 

مختلف و به صورت سه وجهي -4 وجهي -6 وجهي ديده ميشوند .

 

كريستالهاي دي كلسيم فسفات به شكل منشورهاي بيرنگ با يك نقطه

 

انتهايي كه اغلب به شكل روزت يا ستاره يا سوزني و يا گاهي به

 

صورت صفحاتي صاف و گرانولر ديده ميشوند .

 

 

كريستالهاي كلسيم كربنات زرد رنگ و كوچك و دمبلي شكل است و در اسيد استيك

 

ده درصد حل شده و ايجاد كف ميكنند .

 

 

 

سيلندر هاي ادراري

 

ماده زمينه اي سيلندر هاي ادراري از يك نوع ماده  موكو پروتئيني به نام

تام هورسفال كه از طريق ايمني شناسي قابل تشخيص است تشكيل شده است

 

Hyalin cast

 

اين نوع سيلندر فقط از ماده زمينه اي ساخته شده و عوامل مهمي از قبيل

 

PH  - مقدار و نوع مواد محلول در ادرار و ميزان پروتئين اوري در تشكيل

 

اين سيلندر ها دخالت دارند .اين سيلندر ها ممكن است به تعداد كم در ادرار

 

نرمال هم ديده شود ولي وجود تعداد زياد نشاندهنده بيماري است .

 

Fatty cast

 

بيان كننده بيماري هاي كليوي نظير نفروپاتي ديابتي و نا رسايي هاي مزمن

 

كليوي است .

 

Granular cast

 

اكثرا در بيماري هاي مزمن كليوي و در عفونتهاي ادراري و در نارسايي هاي

 

حاد كليوي و در مرحله بهبودي بيمار ديده ميشود اين سيلندر ممكن است در

 

نتيجه دژنره شدن گلبولهاي سفيد يا سلولهاي اپيتليال باشد .

 

WBC cast

 

در مواردي كه در انها نشت گلبول سفيد و التهاب نسج بينابيني در كليه وجود دارد

 

ديده ميشود و شايع ترين اين بيماريها پيلونفريت است .

 

RBC cast

 

وجود ان در ادرار معمولا حاكي از اسيب غشا پايه گلومرولي است و مهمترين

 

سيلندر در ادرار است و در مواردي مثل گلومرونفريت حاد –نفريت لوپوسي

 

و سندرم  گود پاسچر ديده ميشود .

 

Hb cast

 

نشاندهنده هموليز داخل عروقي در بيمار است .مثلا در تزريق خون اشتباهي

 

يا باكتريمي با كلاستريديوم ديده ميشود .

 

Epithellial cast

 

به ندرت ديده ميشود و به علت صدمه و يا نكروز بافت اپي تليال تيوبولهاي

 

كليوي به وجود ميايند .و در بيماريهايي نظير نفروز مرحله نفروتيك –

 

گلومرولونفريت حاد و مزمن ديده ميشود .

 

Waxy cast

 

در بيماريهاي مزمن كليوي ديده ميشود و همچنين در نفروپاتي ديابتي ديده ميشود .

 

Broad cast 

 

وقتي قطر سيلندر از 2 تا 6 برابر قطر سيلندر هاي معمولي بيشتر باشد به اين نام

 

خوانده ميشود تصور ميشود سيلندر  هاي پهن در لوله هاي كليوي اتساع يافته

 

تشكيل ميشود .در امراض مزمن كليوي شديد يا ضايعات حاصل از انسداد

 

دستگاه ادراري اغلب گشادي و انهدام لوله ها وجود دارد و اين سيلندر هاي

 

پهن ديده ميشود

بروسلا

بروسلاها باكتريهاي گرم منفي –كوكوباسيل شكل –هوازي –بي حركت و فاقد قدرت تخميري

هستند .باكتريهاي ويرولان باكتريها ايجاد كلني صاف و شفاف ميكند .بروسلاها براي تامين

انرژي مورد نياز خود از كربوهيدرات ها استفاده ميكنند .و بعضي سوشها توليد كاتالاز

و اكسيداز ميكنند .حساسيت بروسلاها نسبت به حرارت و اسيدها نسبتا زياد است .كليه

محيط هاي كشت بروسلا بايد در اتمسفري از 10درصد دي اكسيد كربن قرار داده شود.

و معمولا تا مدت شش هفته نگهداري شود .اصولا فقط در مراحل حاد و يا هنگام عود

بيماري است كه امكان جدا نمودن بروسلا وجود دارد .

بروسلا ايجاد تب مواج ميكند .و به سه نوع مختلف تقسيم ميشود كه شامل بروسلا كانيس

و بروسلا ابورتوس و بروسلا مليتانسيس ميشود .كه نوع اخر از دو نوع ديگر شديدتر

است .تست هاي اگلوتيناسيون عادي قادر به رد يابي عفونت توسط بروسلا كانيس

نيستند .اگر علائم باليني قويا حكايت از بيماري بروسلوز نمايد ولي تست هاي

اگلوتيناسيون منفي باشد امكان وجود انتي بادي هاي جلوگيري كننده اختصاصي

را نبايد از نظر دور داشت .و بايد تست اگلوتيناسيون با كمك انتي گلوبولين

انجام گيرد يعني تست كومبز رايت .

انتي بادي هاي جلوگيري كننده اختصاصي از نوع IGA وIGGهستند و باعث منفي

ماندن تست در رقت هاي كم سرم ميگردند اين پديده به نام پروزون خوانده ميشود

گر چه در رقت هاي بالاي سرم واكنش مثبت نشان خواهد داد .انتي بادي هاي

جلوگيري كننده در مرحله تحت حاد بيماري ظاهر ميگردند .

انتي ژن سوماتيك انها يك كمپلكس ليپو پلي ساكاريدي پروتئيني است كه از دو نوع

AGM  كه در بروسلا مليتانسيس ديده ميشود و AGA  كه در بروسلا ابورتوس

ديده ميشود .در بروسلوز تحت حاد كشت خون گاهي مثبت و گاهي منفي است

ولي تست هاي پوستي مثبت است .براي پيدا كردن بروسلاها مي توان از كشت مغز استخوان

و بيوپسي غدد لنفاوي و ادرار و مايع نخاع استفاده كرد .در كشت روي محيط CASTANEDA

هر 8-7 روز يك بار بايد ساب كالچر دهيم .ازمايش 2ME  براي تشخيص بروسلوز

مزمن است ازمايش ديگري كه ان هم كار 2ME  را ميكند و به نام DTT كه مخفف

DITHIO   THRETTOR  است و بوي تند و زننده 2ME را ندارد و كار كردن

با ان راحت تر است .

زمان مقاومت بروسلاها در خاك مرطوب يا سايه 2 ماه است .اگر سرم حاوي خون

هموليز باشد ازمايش رايت ممكن است بطور كاذب مثبت گردد و اگر كمپلمان سرم را

قبل از ازمايش غير فعال نمايند تست ممكن است به طور كاذب منفي شود .افرادي كه

واكسن وبا زده اند در سرم انها به علت وجود انتي ژنهاي اشتراكي بين ميكروب وبا

و بروسلا ازمايش رايت انها نيز مثبت ميشود

همه چیز درباره PCR

همه چیز درباره PCR

 

اطلاعات اولیه

این روش فوق العاده ساده بوده و با استفاده از تغییرات حرارت می‌توان چندین فرآیند را به دنبال همدیگر انجام داد. با این تکنیک می‌توان به عنوان یک روش قدرتمند تشخیص بالینی (Diagnostic) برای وجود موتاسیون‌ها در ژنوم انسانی ، یا برای وارد کردن جهش‌های ویژه به داخل ژن همسانه شده ، استفاده کرد.

PCR بطور دستی و با قرار دادن پر زحمت و انتقال لوله‌های آزمایش بین حمام‌های آب دارای دمای لازم ، بوجود آمد. امروزه دستگاههایی بطور تجارتی تهیه می‌شوند که در آنها جایگاههای لوله‌ای با بلوک فلزی حرارت پذیر تعبیه شده است و قابل برنامه ریزی برای تغییر سریع بین دماهای لازم است. π چرخه PCR ، DNAی مورد نظر را 2π بار تکثیر می‌کند.

تاریخچه

در گذشته معمولا از روش های شیمیایی برای تولید قطعات نوکلئوتیدی استفاده می‌کردند، اما این روش ها پر زحمت بوده و نیاز به مدت زمان طولانی داشتند از سال 1980 به بعد عمدتا از روش PCR در آزمایشگاههای زیست شناسی مولکولی استفاده می‌شود.

مراحل PCR

·         مرحله دناتوراسیون DNA: در مرحله اول برای مدت کوتاهی (30S) قطعات DNA را در درجه حرارت 94 درجه سانتیگراد حرارت می‌دهند تا دو زنجیره DNA از هم باز نشود.

·         مرحله پرایمر و مرحله اتصال دو قطعه نوکلئوتیدی: این قطعات معمولا از 25 - 18 باز آلی تشکیل می‌شوند و می‌توانند به قطعات مکمل خود که بر روی ژن مورد نظر قرار می‌گیرند، اتصال یابند. قطعه‌ای که در آن PCR به تعداد زیاد ساخته می‌شود. ما بین دو پرایمر ساخته می‌شود. مرحله اتصال پرایمرها کوتاه بوده و حدودا 30S در دمای 65 - 30 درجه سانتیگراد صورت می‌گیرد.

·         مرحله پلیمریزاسیون یا مرحله سنتز: در این مرحله با دخالت آنزیم DNA پلیمر از بر روی رشته DNA الگو. سنتز DNA با استفاده از نوکلئوتید تری فسفات‌هایی که در محلول وجود دارند، صورت می‌گیرد و برای سنتز DNA همیشه یک رشته DNA به صورت الگو و یک قطعه پلی نوکلئوتیدی به عنوان پرایمر مورد نیاز است.



 

ادامه PCR بعد از چرخه اول

بعد از این 3 مرحله ، چرخه اول تمام می‌شود، چرخه‌های بعدی تکرار چرخه اول است. بدین صورت به دنبال چرخه‌های متعدد PCR قطعه DNA مورد نظر بطور تصاعدی افزایش می‌یابد. یعنی از 20 چرخه ، ژن مورد نظر دارای بیش از 250 هزار خواهد بود. بنابراین روش PCR روش کارا در ازدیاد یک قطعه از DNA است.

کاربردهای مهم PCR

·         تهیه نسخههای متعدد از یک ژن مورد نظر: گاهی برای مطالعات بیولوژی مولکولی لازم است که یک ژن با نسخه‌های نسبتا زیاد در دسترس باشد. بدین منظور می‌توان با استفاده از روش PCR ژن مورد نظر را در مقایسه با بقیه ژن‌ها تکثیر نمود.

·         بررسی حضور یا عدم حضور یک ژن: با استفاده از این روش می‌توان تشخیص داد که آیا یک ژن در یک سلول حضور دارد یا نه؟ گاهی نیز از این مطالعات برای بررسی وجود ژنهای مختلف باکتری‌ها یا ویروس‌ها در بدن افراد استفاده می‌کنند.

·         تشخیص بیماریهای قبل از تولد: با استفاده از PCR و بکار گرفتن پرایمرهای مربوط به یک ژن بیمار و پرایمرهای مربوط به ژن سالم آلل آن می‌توان از تولد کودکان دارای بیماری‌های ژنتیکی جلوگیری کرد. برای این کار بعد از لقاح تخمک در آزمایشگاه ، بعد از رسیدن تخمک به حالت 10 سلولی ، یک سلول را جدا کرده و با استفاده از پرایمرها از ژن مورد نظر PCR صورت می‌گیرد، اگر بعد از PCR منحصرا ژن سالم تکثیر پیدا کرد، این مفهوم هموزیگوت بودن سلول‌های جنینی و سالم بودن آنهاست.

·         تعیین جنسیت جنین: معمولا چند تخمک با چند اسپرم در آزمایشگاه لقاح می‌یابند و سپس اجازه تکثیر به سلول تخم داده و با رسیدن تخم به مرحله ده سلولی ، یکی از سلول‌ها را جدا کرده و بوسیله پرایمرهای ویژه مربوط به کروموزوم y مورد PCR قرار می‌گیرد. کروموزوم y منحصرا در سلول‌های نر دیده می‌شود. اگر قطعه تولید نشده در PCR بوسیله الکتروفورز و بطور دقیق‌تر توسط ساترن بلوتینگ تشخیص داده شد، جنین از نوع پسر و در غیر این صورت دارای کروموزوم‌های xx خواهد بود.

تشخیص بیماریها

کشت میکروبها که جهت تشخیص بیماریهای عفونی در اکثر آزمایشگاهها بکار می‌رود. زمان‌بر بوده و ثانیا باعث افزایش تعداد میکروب‌های بیماریزا و غیر بیماریزا در شرایط آزمایشگاهی می‌گردد. امروزه در برخی آزمایشگاهها روش PCR جایگزین روش‌های کشت شده است. یعنی قطعه‌ای از ژن مربوط به میکروب بیماریزا مورد شناسایی قرار گرفته و پرایمرهای مربوط تولید می‌شوند، با استفاده از این پرایمرها می‌توان تشخیص داد که آیا ویروس ایدز در داخل بدن وجود دارد یا نه؟


 

مشکل PCR و راه حل آن

اشکال PCR ، آلودگی نمونه‌های مورد بررسی توسط قطعات DNA خارجی است. اگر قبلا در داخل دستگاهی PCR یک نمونه انجام گرفته باشد. و ذره کوچکی از آن در داخل دستگاه باقی بماند. در PCR نمونه بعدی مشکل ایجاد خواهد کرد. برای رفع مشکل امروزه از ظروف یکبار مصرف استفاده می‌شود. کلیه ظروف قبل از استفاده اتوکلاو می‌شوند تا سلول‌ها و مولکولهای موجود در آنها ، حتی‌الامکان غیر فعال می‌شوند.

یکی از روش‌های پیشنهادی انجام PCR داخلی یا Nestied PCR است. از این روش با استفاده از دو پرایمر قطعه‌ای از DNA را تکثیر می‌دهند و سپس قطعه‌ای دیگر در داخل DNA‌های تکثیر شده PCR می‌شود. بدین صورت احتمال آلودگی کاهش می‌یابد.

روشهاي تغييريافته PCR و كاربرد اين روشها در شناسايي و درمان


واكنش زنجيرههاي پليمراز (PCR) روشي است براي تكثير اختصاصي قطعات DNA كه نخستين بار در سال 1985 گزارش شد. در اين روش قطعهاي از DNA به طور انتخابي با بهكارگيري دو پرايمر اوليگونوكلوئوتيدي و آنزيم پليمراز Tag ميتوان تا ده هزار برابر تكثير كرد. هريك از اين دو پرايمر به رشتههاي مخالفشان در روي DNA هدف متصل شده و مكان آنها بهگونهاي است كه سنتز زنجيره DNA توسط آنزيم پليمراز تنها در ميان دو پرايمر انجام ميگيرد.

 
از آنجا كه زنجيره‌هاي تازه ساخته شده خود مكمل پرايمرها است، اين چرخه مي‌تواند پس از يك مرحله واسرشته شدن زنجيره‌هاي ‏DNA‏ از هم تكرار شود. به عبارتي ‏PCR‏ روشي است براي يك برنامه دوره‌اي مشتمل براي تكرار گرم و سرد كردن و ‏DNA‏ به‌كمك يك آنزيم ‏DNA‏ پليمراز مقاوم به گرما و يك جفت پرايمر تحت تكثير انتخابي قرار مي‌گيرد و از طريق اين روش ‏DNA‏ به صورت تصاعد هندسي زياد مي‌شود. امروزه روش ‏PCR‏ جايگاه بسيار مهمي را در جنبه‌هاي مختلف مهندسي ژنتيك، بيولوژي مولكولي، ميكروب‌شناسي تشخيصي تشخيص سرطان و بيماري‌هاي ژنتيك، تشخيص هويت، جرم شناسي (پزشكي قانوني جهت تشخيص منشأ نمونه اسپرم، خون و ...) تعيين ترادف، باستان‌شناسي، مطالعات تكاملي موجودات و ... پيدا كرده است. كاربرد بيشتر و دقيق‌تر تكنيك ‏PCR‏ در تشخيص، روش‌هاي تغيير يافته‌اي از آن به وجود آمده است كه به تعدادي از آنها اشاره مي‌شود.


مالتيپلكس پي سي آر (Multiplex-PCR)
‏ يكي از روش‌هاي تغييريافته ‏PCR‏ است كه در آن تنها يك جايگاه ژني مورد بررسي قرار مي‌گيرد، با استفاده از پرايمرهاي مختلف مي‌توان چندين جايگاه را مورد بررسي قرار داد و از چندين جفت پرايمر اختصاصي جهت تكثير استفاده مي‌شود. كاربردهاي اين روش مي‌تواند شامل موارد زير باشد: ‏
‏1) بخش‌هاي بزرگي از يك ‏DNA‏ (هدف)، جهت جست‌وجوي تغييرات مي‌تواند بررسي شود. براي مثال كشف نقص‌ها در بيماري ديستروفي عضلاني روشن يا كشف بخش‌هاي مختلف ‏IS6110‎‏ و ‏IS986‎‏ در مايكروباكتريوم توبر كلوزيس عامل بيماري سل، ‏
‏2) بخش‌هاي غيرمربوط به هم در ژنوم هدف مي‌تواند مورد آزمايش واقع شود و‏
‏3) مي‌توان از طريق اين روش با پرايمرهاي مختلف به جست‌وجوي عوامل مختلف پرداخت، مانند شناسايي عوامل شايع مننژيت. اين روش بيشتر براي شناسايي جايگاه‌هايي از ژن‌ها به كار مي‌رود كه انواع زيادي از جهش در آنها به وقوع مي‌پيوندد.‏


آرتي-پيسي آر (RT-PCR)
‏ اين روش به ‏PCR‏ نسخه‌برداري معكوس نيز معروف است كه ماده اوليه در آن ‏RNA‏ است. اولين مرحله در اين روش تبديل ‏RNA‏ به ‏DNA‏ (‏DNAاي كه مكمل توايس‌هاي ‏mRNA‏ است) توسط آنزيم نسخه‌بردار معكوس صورت مي‌گيرد (‏RT‏). برخي از موجودات مانند برخي از ويروس‌هاي ‏RNAدار، ژنومشان تنها از ‏RNA‏ ساخته شده است. بعضي از ويروس‌ها مانند ويروس هپاتيت ‏B‏ هرگز به شكل ‏DNA‏ مابين  در اثر آنزيم نسخه‌بردار معكوس درنمي‌آيد. آنزيم نسخه‌بردار معكوس (‏RT‏) در اين روش از  "‏Avian Myeloblastosis Virus (AMV)‎‏" و "‏Moloney Murine Leu Kemia Virus (MMLV)‎‏ " به‌دست آمد.
كاربرد اين آنزيم به‌دليل آن‌كه آنزيم به حرارت حساس بود در ابتدا پايين بود ولي با كشف باكتري به نام "ترموس ترموفيلوس" يك ‏DNA‏ پليمر از مقاوم به نام (‏Tth‏) بهبود يافت كه در حضور يون ‏Mn+2‎‏ داراي فعاليت نسخه‌برداري معكوس است و در دماي 72 درجه سانتيگراد توسط اين آنزيم از روي ‏RNA، ‏DNA‏ ساخته مي‌شود و سپس ‏Mn+2‎‏ اضافي توسط اتيلن گليكول تترااستيك اسدي (‏EGTA‏) حذف مي‌شود و سپس اين آنزيم از ‏DNAاي كه خود ساخته استفاده و آن را تكثير مي‌كند.‏


آرمز پيسيآر (ARMS-PCR)
‏ اين روش تكثيري قدرتمند براي مشخص كردن جهش‌هاي نقطه‌اي است. در اين روش از پرايمرهاي جهش يافته و طبيعي در دو لوله جداگانه استفاده مي‌شود. اگر عمل پليمريزاسيون در لوله حاوي پرايمر طبيعي انجام شود، نشان‌دهنده نبود جهش نقطه‌اي در باز مورد نظر است و اگر عمل پليمريزاسيون در لوله‌ حاوي پرايمر جهش يافته انجام شود، نشان‌دهنده حضور جهش نقطه‌اي در باز مورد نظر است. اين روش نام‌هاي ديگري نيز دارد از جمله ‏MAMA-PCR‏ مخفف ‏Amplificatin Multation Assay‏ ‏Mismatch‏ و ‏COP-PCR‏ مخفف ‏Competitive Oligonucleotide Primming‏. ‏


نستد پيسيآر (Nested-PCR)
در اين روش از دو جفت پرايمر استفاده مي‌شود، طوري كه جفت دوم در بني جفت اول جاي مي‌گيرد. در اين روش ابتدا پرايمر بيروني توالي هدف در طول 30-15 چرخه تكثير مي‌شود، سپس محصول ‏PCR‏ حاصل به لوله‌اي ديگر منتقل مي‌شود و به‌عنوان الگو و با استفاده از جفت پرايمر داخلي مرحله دوم ‏PCR‏ انجام شده و ترادف كوچكتري از ‏DNA‏ كه درون ‏PCR‏ اولي است، به اندازه 40-15 چرخه تكثير مي‌شود.‏
مزاياي اين روش تغيير يافته ‏PCR‏ عبارت است از: 1) نياز به پروب (كاوشگر) و تأييدهاي بعدي كمتر است، 2) حساسيت در اين روش به ميزان زيادي بالاتر است و 3) به دليل انتقال محصول ‏PCR‏ دور اول به لوله جديد، ممانعت كننده‌ها رقيق مي‌شود. اين روش در تعيين جنسيت جنين در سه ماهه اول بارداري استفاده شده و از اين طريق توانسته‌اند بيماري‌هاي وابسته به جنس را تعيين كرده و از تولد كودكان بيمار جلوگيري كنند.‏
همچنين ويروس "سيتومگالوويدوس" كه مي‌تواند سبب ناشنوايي در 1% از كودكان شود، توسط اين روش تشخيص داده شده و امكان درمان زودهنگام از اين طريق امكان‌پذير است. جنين‌هاي مبتلا به سندروم داون نيز در مرحله بارداري مادر با اين روش تشخيص داده شدند.


 Real-Time PCR
‏ به علت ورود نسل جديدي از ترموسايكلرها با سيستم فلورومتري كه اجازه پايش پيوسته خاصيت فلوئورسانس محصول ‏PCR‏ در زمان جمع شدن را مي‌دهد، اين روش ابداع شد. در اين روش از كاوشگرها يا پروب‌هاي هيبريداسيون نشان‌دار شده با رنگ‌هاي فلورسانس در انتهاي 5 يا 3 استفاده مي‌شود. كه امكان پايش پيوسته محصول ‏PCR‏ را بدون جداسازي آنها در روش‌هاي الكتروفورز در ژل آگاروز يا ژل پلي آكريل آميد مي‌دهد. اين سيستم در سال 1992 كشف شد. اين روش به دليل كاهش زمان سيلك‌هاي ‏PCR، حذف مرحله ‏Post-PCR‏ و كاربرد نشانگرهاي فلوروژنيك و روش‌هاي حساس آشكارسازي تابش آنها باعث افزايش سرعت اين سيستم نسبت به سيستم ‏PCR‏ معمولي شده است. سازندگان و كاربران اين روش سعي مي‌كنند محصول ‏PCR‏ كوچك‌تر طراحي كنند تا سرعت افزايش يابد اما تجربه نشان داده كه كاهش اندازه محصول لزوماً بازده ‏PCR‏ را بهينه نمي‌كند. البته اين روش داراي معايبي نيز است از جمله مي‌توان به عدم ناتواني در مشخص كردن اندازه محصول بدون باز كردن سيستم و ناسازگار بودن برخي پلت فرم‌ها با شيمي برخي رنگ‌هاي فلورژنيك اشاره كرد. براي شناسايي بسياري از ويروس‌هاي عامل بيماري‌هاي انسان از اين روش استفاده شده است. ‏

مراجع:
1. Guven.S,Yilmaz. E,kutby.H and eta. The Diagnostic Value of Polymerase chain Reaction (PCR) in Bronchialveolveolar Lavage. Eastern Journal of Medicine 9(1): 07-12, 2004
2. Maeda.S and etal. Helicobacter Pylori specific nested PCR assay for the detection of 23 S rRNA mutation associated with clarithomycin resistance. Gut.bmj.com.2007
3. Pusterla.N and etal. Real time polymerase chain Teaction: A Novel Molecular Diagnostic Tool for equine Infectious Disease. Journal vet International Medical; 20:3-12, 2006.
4. Salto‎-Telez M,etal. Multiplex RT-PCR for the Detection of Leukemia-Associated Translations. Journal of Molecular Diagnostic; 54):231-236, 2003.‎
5. Vakulenko.S.B and etal. Multiplex PCR for Detection of Aminoglycoside Redsistance Gene in Enterococci. Animicrobal agents and chemotherapy;‎ 47(4)1423, 2003.
6. Hajbeigi.H and Radpour.R. Gentic Terminology Book. First edition. 424 Page 2002

با تشکر از استاد سمیه آزمون

 
  BLOGFA.COM