با عرض سلام خدمت شما بیننده عزیز به پربازدیدترین وبلاگ میکروبیولوژی خوش آمدید لطفا نظرات ارزنده و انتقادات سازنده خود را در قسمت نظرات برای یک وبلاگ بهتر در اختیار ما قرار دهید.برای کسب جدیدترین خبرها و مقالات ایمیل خود را در قسمت خبرنامه وارد کنید تا جدیدترین تغییرات و به روزرسانی وبلاگ به اطلاع شما برسد با تشکر مدیریت وبلاگ میکروبیولوژی مسجدسلیمان میکروبیولوژی مسجدسلیمان
زیست شناسی سلولی و ملکولی میکروبیولوژی
همه چیز در مورد پیوند مغز استخوان

همه چیز در مورد  مغز استخوان

پیوند مغز استخوان یک روش درمانی به جای سلولهای بنیادی خون است، معمولا روند آماده سازی برای مغز استخوان در حذف سلول های T و گاهی اوقات لکوسیت های دیگر (سلول های سفید خون) احتمال واکنش آنتی ژن است. دلایل متداول برای پیوند مغز استخوان وجود دارد.موفقیت پیوند مغز استخوان بسیار متغیر است و بستگی به عوامل متعددی از جمله نوع سرطان و سلامت عمومی فرد دارد

مغز استخوان یک بافت اسفنجی شکل داخل استخوان است که سلولهای خونی در آن ساخته میشود. سلولهای خونی برای سلامت بدن شما لازم هستند. سلول های خون شامل انواع زیر است:‏

‏- گلبول های قرمز :این سلول ها اکسیژن را در بدن حمل می کنند .

- گلبول های سفید:این سلول ها مسئول مبارزه با عفونت در بدن هستند .

- پلاکت ها :پلاکت ها بطور طبیعی از خونریزی جلوگیری می کنند .

تمام این سلول ها از یک نوع سلول اولیه در مغز استخوان به نام سلول بنیادی ‏‎(Stem cell )‎‏ ساخته می شود .

پیوند مغز استخوان چیست؟

پیوند مغز استخوان در حقیقت جایگزینی مغز استخوان ناسالم با یک مغز استخوان سالم است. اگر مغز استخوان بیمار شما به خوبی نتواند سلول های خونی را برای بدن فراهم کند باید با یک  مغز استخوان سالم جایگزین شود . به این عمل پیوند مغز استخوان میگویند. پیوند مغز استخوان مثل سایر پیوندها(مثلا پیوند کلیه، کبد و قلب)نیاز به عمل جراحی ندارد. برای پیوند مغز استخوان ابتدا مغز استخوان نارسا کاملا به وسیله داروهای شیمی درمانی تخریب می شود و پس از آن مغز استخوان سالم (مانند تزریق خون) به فرد تزریق می گردد. مغز استخوان سالم بطور خودبخود در استخوان فرد جایگزین می شود .

پیوند مغز استخوان برای چه کسانی انجام می شود؟

پیوند مغز استخوان برای درمان بسیاری از بیماری ها که مغز استخوان فرد را درگیر می کند استفاده می شود. مثلا بیماری هایی که در آن مغز استخوان بیش از اندازه و یا کمتر از میزان مورد نیاز سلول می سازد و یا اینکه سلول های غیر طبیعی می سازد .

انواع پیوند مغز استخوان :

- *آلوژنیک :

در این نوع از پیوند ، مغز استخوان از یک دهنده سالم گرفته می شود و به بیمار تزریق می گردد. معمولا این دهنده از بستگان درجه اول فرد(در اکثر موارد خواهر یا برادر شخص) میباشد که پس از آزمایشات ژنتیک انتخاب شده است.

‏*- اتولوگ :

در این نوع از پیوند، مغز استخوان از خود فرد، ‏زمانی که پس از درمان در وضعیت طبیعی قرار میگیرد، گرفته میشود .

- *پیوند از خون بند ناف :

اگر فرد بارداری از بستگان بیمار در دسترس باشد، پس از اینکه بچه متولد شد، سلول های بنیادی‏‎(Stem cell)‎‏ از جفت و خون بند ناف جمع آوری شده و برای تزریق به بیمار آماده می گردد.

شرایط لازم برای دریافت پیوند مغز استخوان چیست؟

اگر بیمار شما شرایط زیر را داشته باشد شانس دریافت پیوند مغز استخوان را دارد :

۱-      در مرحله موقت بهبودی باشد .

۲-      سن او کمتر از ۵۰ سال باشد .

۳-      یک اهدا کننده مناسب برای وی پیدا شود .

در طی پیوند چه اتفاقاتی می افتد؟

فرایند پیوند مغز استخوان از قسمت های مختلفی تشکیل شده است. شما و بیمارتان با اصطلاحات و وقایع جدیدی برخورد خواهید کرد .

اولین مرحله در پیوند مغز استخوان تخریب کامل مغز استخوان ناسالم است. در این مرحله بیمار برای دریافت مغز استخوان جدید آماده می شود. به بیمار شما داروهای خاصی براساس بیماری اولیه داده می شود. مغز استخوان ناسالم کاملا ازبین می رود. پس از آن سیستم ایمنی فرد توسط داروهای خاصی تضعیف شده تا برای دریافت مغز استخوان جدید آماده شود .

 


برچسب‌ها: همه چیز در مورد پیوند مغز استخوان
+ نوشته شده در  ساعت   توسط مینا | 

همه چیز درباره آيين‌نامه دوره كارشناسي‌ارشد ناپیوسته

تاریخ : 19/1/87

شماره : 154/21

 

آيين‌نامه دوره كارشناسي‌ارشد ناپیوسته

 

مقدمه

سرعت پرشتاب علم و فناوري و ظهور پيشرفت‌هاي عظيم علمي در هزاره سوم، كشورهاي جهان  را در شرايطي قرار داده است كه ، ايجاد تحول راهبردي در برنامه‌هاي توسعه امري حياتي و گامي اساسي در جهت توسعه همه جانبه است و بر اين مبنا آموزش عالي و تمامي كارگزاران نظام علمي كشور و به طور كلي نهادهاي مولد انديشه نقش كليدي در تبيين و تحقق اين تحول راهبردي- با الهام از برنامه‌هاي توسعه و اهداف بلند سند چشم‌انداز 20 ساله جمهوري اسلامي ايران- خواهند داشت.

متوليان و برنامه‌ريزان حوزه آموزش عالي  كشور نيز همسو و هماهنگ با نهضت تحول خواهي كشور و بهره‌مندي از فرصت‌هاي پيش آمده، در راستاي ارتقاي كيفيت، لزوم بازنگري آيين‌نامه‌ها،  ضوابط و مقررات آموزشي را در صدر اولويت‌هاي كاري خود قرار داده‌اند. براي نيل به اين مقصود، در گام نخست، آيين‌نامه دوره‌هاي كارشناسي‌ارشد به لحاظ ضرورتي كه در بازنگري و اصلاح آن احساس مي‌شد- با همكاري و هماهنگي  دانشگاه‌ها  و مؤسسات آموزش عالي و-  طي جلسات متعدد كارگروه آموزشي، به سه شيوه آموزشي - پژوهشي، آموزشي، و پژوهشي تدوين شده است.

ماده1- هدف از تدوين آيين‌نامه دوره‌هاي كارشناسي‌ارشد به سه شيوه
 «آموزشي – پژوهشي»، «آموزشي» و «پژوهشي»، تقويت و توسعه دوره‌هاي تحصيلات تكميلي، ارتقاي كيفيت، تنوع بخشي به شيوه‌هاي نوين ارایه آموزش، پاسخگويي مناسب به افزايش تقاضا براي ورود به دوره‌هاي تحصيلات تكميلي، تقويت و ارتقاي سطح كيفي و كمي اين دوره‌ها و همسان‌سازي آن با برنامه‌هاي توسعه و ديگر اسناد راهبردي كشور است تا با بهره‌مندي از آن در تربيت متخصصان و پژوهشگران ماهر و برجسته در سطح كشور بكوشيم.

مادة 2- تعاريف

دورة كارشناسي‌ارشد ناپيوسته: دوره‌اي بالاتر از دورة كارشناسي است كه براساس برنامه‌هاي مصوب شوراي گسترش ‌آموزش عالي، به اخذ مدرك كارشناسي‌ارشد در رشته مربوط منتهي مي‌شود.

شيوه آموزشي – پژوهشي: دوره‌اي كه محتواي برنامه آن مشتمل بر واحدهاي درسي و  پايان‌نامه است.


 شيوه آموزشي: دوره‌اي با محوريت آموزش ، است كه دانشجو پس از گذراندن  واحدهاي درسي و بدون گذراندن پايان‌نامه دانش‌آموخته مي‌شود .

شيوه پژوهشي: دوره‌اي با محوريت پژوهش كه دستاورد آن (ارائه فناوري جديد، ارائه نظريه و ايده جديد، توليد دانش فني، ثبت اختراع،...) شود و مشتمل بر اخذ واحدهاي درسي محدود و الزام به ارایه پايان‌نامه است.

پايان‌نامه: فعاليت پژوهشي- تحقيقاتي است كه در يك زمينه رشته تحصيلي مربوط و تحت راهنمايي استاد راهنما انجام مي‌گيرد.

مؤسسه: منظور دانشگاه‌ها و مؤسسات آموزش عالي و پژوهشي مجري دوره‌هاي كارشناسي‌ارشد است.

شورا- منظور شوراي تحصيلات تكميلي مؤسسه است.

سمینار- منظور تحقیق و تتبع نظری است.

ماده3- نحوه اجراي دوره: اين دوره به صورت روزانه، شبانه، نيمه‌حضوري، مجازي و بين‌المللي طبق ضوابط مربوط قابل اجرا مي‌باشد.

ماده 4- شرايط ورود

الف- داشتن شرايط عمومي ورود به آموزش عالي

ب- دارا بودن مدرك رسمي پايان دوره كارشناسي اعم از پيوسته و ناپيوسته مورد تأييد وزارت علوم، تحقيقات و فناوري؛

ج- قبولي در آزمون ورودي مورد تأييد وزارت يا كسب پذيرش از مؤسسه براساس مقررات مصوب؛

ماده5- دروس جبراني

چنانچه رشته دوره كارشناسي با رشته دوره تجانس نداشته باشد دانشجو بايد به تشخيص گروه آموزشي، تعدادي از دروس را تحت عنوان جبراني بگذراند.

تبصره 1- حداكثر دروس جبراني 12 واحد مي‌باشد كه در ابتداي دوره قبل از دروس اصلي ارائه مي‌شود.

تبصره 2- در انتخاب دروس، اولويت با دروس جبراني است  تعيين تعداد و عناوين دروس براساس برنامه مصوب در هر رشته و زمان انتخاب آنها بر عهده شوراي گروه است.

تبصره 3-  دروسي را كه دانشجو قبلاً در دوره كارشناسي گذرانده است، تكرار آن  در صورتي كه عنوان درس براساس سرفصل برنامه مصوب كارشناسي ارشد باشد، مجاز نيست.

تبصره 4- حداقل نمره قبولي در هر درس اعم از دروس دوره يا جبراني 12 است.

ماده 6- مؤسسه موظف است به تناسب تعداد پذيرفته‌شدگان در اين دوره، مشاور تحصيلي براي هدايت دانشجويان تعيين نمايد.


ماده 7- تعداد واحدهاي درسي را كه دانشجو بايد در هر نيمسال تحصيلي در اين دوره اخذ نمايد حداقل 8 و حداكثر 12 است.

ماده 8- ارزشيابي تحصيلي

 ميانگين نمرات دانشجو در دو نيمسال نبايد از 14 كمتر باشد.

ماده 9- آخرين نيمسال تحصيلي، دانشجو از شرط حداقل اخذ واحد معاف است و چنانچه ميانگين نمره دانشجو در اين نيمسال كمتر از 14 باشد، مشروط تلقي مي‌شود.

ماده10- ميانگين كل نمرات دانشجو در پايان دوره نبايد از 14 كمتر باشد، در غير اين صورت، دانش‌آموخته دوره كارشناسي‌ارشد شناخته نمي‌شود.

تبصره- دانشجويي كه پس از گذراندن كليه دروس دوره در هر سه شيوه، ميانگين كل نمرات او از 14 كمتر باشد- در صورتي كه حداكثر مدت مجاز تحصيل وي به پايان نرسيده باشد- مي‌تواند دروسي را كه در آنها نمره كمتر از 14 احراز كرده است، فقط در يك نيمسال تكرار كند و در صورت جبران كمبود ميانگين كل، دانش‌آموخته مي‌شود. دانشجويي كه به هر دليل نتوانند از اين فرصت استفاده كند، از ادامه تحصيل محروم مي‌شود و مدركي دريافت نمي‌كند.

ماده 11- حضور و غياب

حضور دانشجو در تمامي برنامه‌هاي درسي و ديگر فعاليت‌هاي آموزشي و پژوهشی دوره الزامي است. غيبت دانشجو در هر درس نبايد از  16/3 مجموع ساعات آن درس تجاوز كند، در غير اين صورت نمره دانشجو در آن درس صفر محسوب مي‌شود.

تبصره 1: در صورتي كه غيبت دانشجو در يك درس، بيش از حد مجاز بوده و از نظر مؤسسه، موجه تشخيص داده شود، آن درس از مجموعه دروس انتخابي دانشجو حذف مي‌شود. در اين صورت رعايت حد نصاب 8 واحد در آن نيمسال الزامي نيست. ولي آن نيمسال از نظر طول تحصيل براي دانشجو نيمسال الزامي نيست. ولي آن نيمسال از نظر طول تحصيل براي دانشجو يك نيمسال كامل محسوب مي‌شود. 

تبصره 2: غيبت در شيوة پژوهشي، ارزيابي ناموفق واحدهاي پژوهشي اخذ شده در آن نيمسال است كه طبق نظر هيأت داوران در مادة 33 انجام مي‌شود.

ماده 12- غيبت غير موجه در امتحان هر درس منجر به نمره صفر در آن درس مي‌شود.

تبصره: در صورتي كه غيبت دانشجو در امتحان، از نظر مؤسسه، موجه تشخيص داده شود، درس مزبور حذف مي‌شود.

ماده13- مرخصي تحصيلي

دانشجوي دوره كارشناسي‌ارشد در هر سه شيوه مي‌تواند حداكثر يك نيمسال از مرخصي تحصيلي استفاده نمايد، مدت مذكور جزو سنوات تحصيلي دانشجو محسوب مي‌شود.


ماده14- انصراف، اخراج و ترك تحصيل

دانشجو مي‌تواند به هر دليل از تحصيل اعلام انصراف نمايد. در اينصورت بايد درخواست خودر را مبني بر انصراف به مؤسسه تسليم نمايد، چنانچه دانشجو بعد از يك ماه درخواست خود را پس نگيرد  آن مؤسسه نسبت به صدور گواهي انصراف اقدام مي‌نمايد.

تبصره1- دانشجوي انصرافي يا اخراج از تحصيل ( مشروطي دو نيمسال، سنوات بيش از حد مجاز) موظف است به تعهداتي كه سپرده است عمل نمايد.

تبصره2- دانشجوي منصرف يا اخراج از تحصيل مي‌تواند درصورت تسويه حساب كامل با مؤسسه مجدداً درآزمون شركت نمايد.

ماده15- طول دوره

طول مدت دوره در هر سه شيوه حداكثر 2 سال مشتمل بر 4 نيمسال تحصيلي است.

تبصره- درموارداستثنايي افزايش طول مدت دوره با تشخيص شوراي تحصيلات تكميلي دانشگاه مجاز است. در هر صورت مدت دوره در هر سه شيوه نبايد از 5/2 سال تجاوز نمايد.

ماده16- انتقال ، تغيير رشته و مهمان

انتقال و تغيير رشته در هر سه شيوه دوره كارشناسي‌ارشد ممنوع است.

تبصره 1- انتقال از دوره شبانه به روزانه ، نيمه حضوري و مجازي به حضوري اعم از (روزانه و شبانه) و از دانشگاه‌هاي غير دولتي به دانشگاه‌هاي دولتي ممنوع است.

تبصره 2- انتقال از يك شيوه به شيوه ديگر با رعايت سنوات دوره در اختيار مؤسسه آموزش عالي است.

تبصره 3- هر دانشجو در هر سه شيوه كارشناسي‌ارشد مي‌تواند حداكثردو نيمسال را با موافقت مؤسسه مبدأ و مقصد به عنوان مهمان بگذراند.

ماده17- معادل سازي دروس دردوره كارشناسي‌ارشد با نظر گروه آموزشي و با شرايط زير امكانپذير است.

الف- پذيرش وي براي ورود به دوره مورد تأييد وزارت باشد.

ب- مؤسسه قبلي دانشجو در رشته تحصيلي مورد تأييد وزارت باشد.

ج- سرفصل دروس گذرانده دانشجو براساس برنامه‌هاي مصوب شوراي برنامه‌ريزي باشد.

ماده18- استاد راهنما

استاد راهنما دردوره كارشناسي‌ارشد آموزشي- پژوهشي و پژوهشي به پيشنهاد دانشجو و با موافقت يكي از اعضاي هيات علمي با مرتبه حداقل استادياري و تأييد شورا تعيين مي‌شود.

تبصره- چنانچه استاد راهنما خارج از مؤسسه آموزش عالي انتخاب مي‌شود به جاي شرط استادياري داشتن مدرك دكتري الزامي است.

ماده 19- استاد مشاور به پيشنهاد استاد راهنما پس از تأييد شورا‌ي گروه از اعضاي هيأت علمي داخل يا متخصصان خارج از دانشگاه انتخاب مي‌شود.

ماده 20 - ارزشيابي پايان نامه

الف- نمره از 19 تا 20 : عالي

       نمره از 18 تا 99/18: بسيار خوب

       نمره از 16 تا 99/17: خوب

       نمره از 14 تا 99/15: قابل قبول

ب- نمره كمتر از 14: غيرقابل قبول

تبصره - چنانچه ارزشيابي پايان نامه غير قابل قبول باشد دانشجو مجاز است حداكثر يك نيمسال در مدت مجاز تحصيل در جلسه دفاعيه شركت و مجدداً از پايان نامه دفاع كند. دانشجویی که در فرصت تعیین شده نتواند از پایان نامه خود با موفقیت دفاع نماید، از ادامه تحصیل و دریافت مدرک تحصیلی محروم می شود.

ماده 21- به دانشجوی کارشناسی‌ارشد که به هر دلیل از تحصیل باز می ماند، فقط یک گواهی که دانشجو چه دروسی را در چند واحد و با چه نمره ای گذرانده است اعطا مي‌شود.

ماده 22- ارزشيابي پايان نامه در جلسه دفاعيه توسط هيأت داوران انجام مي‌شود.

ماده 23- تركيب هيأت داوران براساس دستورالعمل شورا است.

ماده 24- گواهينامه پايان دوره كارشناسي‌ارشد به هر سه شيوه (آموزشي - پژوهشي، آموزشي، و پژوهشي) ارزش یکسانی داشته و مي‌توانند در دوره تحصيلي بالاتر ادامه تحصيل دهند.

ماده 25- تعداد واحدهای دوره كارشناسي‌ارشد در هر سه شيوه (آموزشي - پژوهشي، آموزشي، و پژوهشي) بر حسب رشته حداقل 28و حداکثر 32 واحد است.

* * *

الف- شيوه آموزشي - پژوهشي

ماده26- تعداد واحد پايان نامه در اين شيوه حداقل 4 و حداكثر 6 واحد درسي براي همه رشته‌ها‌ و براساس برنامه مصوب مي‌باشد.

 ماده 27- پايان نامه

دانشجو موظف است پس از پايان نيمسال اول و قبل از شروع نیمسال سوم تحصیلی، موضوع پايان نامه خود را با نظر استاد يا اساتيد راهنما و تأييد گروه مربوط انتخاب نمايد. موضوع پایان نامه پس از تأیید شورای تحصیلات تکمیلی دانشکده قطعیت می یابد.

 

ب- شيوه آموزشي

ماده 28- در این شیوه تمامي دوره به صورت واحدهاي درسي بدون پايان نامه خواهد بود كه گذراندن حداقل 2 و حداكثر 4 واحد سمينار (تحقيق و تتبع نظري) الزامي است.

* * *

ج- شيوه پژوهشي

ماده 29 – این شیوه پذیرش برای مؤسسات پژوهشی بوده و در مورد مؤسسات آموزشی منوط به تأمین کل هزینه ها (انجام تحقیق و حق الزحمه پایان نامه) از محل درآمدهای اختصاصی طرح پژوهشی کاربردی استاد راهنما قابل اجرا می باشد.

ماده 30 - دانشجو طي نيمسال اول موظف است موضوع پژوهش خود را با نظر استاد راهنما و تأييد گروه انتخاب نمايد.

ماده 31 – تعداد واحدهاي درسي در اين شيوه 6 تا 10 واحد است و دانشجو می تواند همزمان با واحدهای آموزشی، واحدهای پژوهشی خود را با نظر استاد راهنما و تأیید گروه انتخاب نماید.

ماده 32- حضور و غياب دانشجو در مرحله پژوهش در اين شيوه با نظر استاد راهنما و تأييد گروه و بر اساس تعداد جلسات مشاوره و راهنمايي صورت مي پذيرد.

ماده 33 – روند پيشرفت پژوهش دانشجو در هر نيمسال با حضور استاد راهنما، نماینده تحصیلات تکمیلی مؤسسه و یکنفر از اعضای هیأت علمی متخصص به انتخاب مدیر گروه ذیربط، مورد ارزيابي قرار مي‌گيرد.

تبصره 1: كل واحدهاي پايان‌نامه در اين شيوه به سه نيمسال تقسيم شده و دانشجو در هر نيمسال يك سوم ( ) آنها را تحت عنوان بخش اول پايان‌نامه اخذ مي‌نمايد.

تبصره 2- حداقل نمره قبولي پس از داوري روند پيشرفت پژوهش دانشجو در هر نيمسال نمره 14 است.

تبصره 3- چنانچه نمره پيشرفت پژوهشي دانشجو در هر ارزيابي كمتر از 14 باشد وي در آن نيمسال مشروط تلقي مي‌شود.

ماده34 - ارزيابي نهايي در اين شيوه، دفاع از پايان نامه است كه در آخرين مرحله تحصيل دانشجو انجام مي‌شود.

* * *

سایر مقررات:

ماده 35-  اجراي هر يك از شيوه‌ها «آموزشي- پژوهشي»، «آموزشي» و «پژوهشي» دردوره توسط مؤسسه با مجوز از شوراي گسترش آموزش عالي مجاز است.

ماده 36-  در مواردي كه آيين‌نامه ساكت است تصميم گيري بر عهده شورا مي‌باشد.

ماده 37 - آيين‌نامه دربر گيرنده اصول و ضوابط كلي دوره كارشناسي‌ارشد به سه شيوه اجرايي مي‌باشد و مؤسسه موظف است دستورالعمل اجرايي آن را در چارچوب آيين‌نامه تدوين و پس از تصويب در شورا اجرا كند.

ماده 38  - تفسير آيين‌نامه برعهده معاونت آموزشي وزارت است و در صورت بروز ابهام، نظر معاونت مذكور مورد استناد قرار خواهد گرفت.

ماده 39- آيين‌نامه آموزشي دوره كارشناسي‌ارشد در 39 ماده  و 19  تبصره  در جلسه 703 مورخ 7/10/87 شوراي برنامه‌ريزي آموزش عالي به تصويب وزير محترم علوم، تحقیقات و فناوری رسيد و از نیمسال اول تحصيلي 89-88 به مدت سه سال قابل اجرا است  كه پس از مدت مذكور با ارزيابي از  خروجي‌‌هاي دوره و در صورت موافقت تمديد خواهد شد. با ابلاغ اين آيين‌نامه‌، كليه آيين‌نامه‌ها و بخشنامه‌هاي مغاير با آن ملغي اعلام مي‌شود./


برچسب‌ها: همه چیز درباره آيين‌نامه دوره كارشناسي‌ارشد ناپیوس
+ نوشته شده در  ساعت   توسط مینا | 

همه چیز در مورد اجزاء PCR

الگوهای اسید نوکلئیکی:

طیف وسیعی از نمونه های DNA و RNA در واکتش PCR به عنوان الگوبه کار می روند.جهت آگاهی از مقدر الگوی مورد نیاز باید آزمایش بهینه سازی شود. به طور معمول این میزان از یک نانوگرم در مورد DNA  الگویکلون شده تا بیش از یک میکروگرم در مورد DNA  ژنوم انسانی متغیر است.در واکنش PCR حتی یک سلول ویا حتی یک مولکول الگو نیز کفایت می کند از اینرو جلوگیری از آلودگیحیاتی می باشد.یکی از نکات مهم در تعیین غلظت الگو,کاربردPCR  ومنبعی است که الگو از آن تهیه می شود.بر اساس مقایسات انجام شده تعداد 3در10 به توان 5  مولکول الگو به عنوان استاندارد از الگو جهت آغاز واکنش PCR عنوان شده است که این میزان بر اساس منابع مختلف غلظت های مختلفی را شامل می شودچنانچه لازم است تعداد چرخه های یک واکنش تقلیل یابد می توان تعداد مولکول های یک الگو را افزایش داد در غیر اینصورت توصیه نمیشود.

منابع مختلف الگو و غلظت هر یک از منابع الگو جهت تهیه تعداد کپی مولکول بهینه در واکنش PCR ذکر شده

نوع منبع DNA

 غلظت 3در 10 به توان 5 مولکول DNA

DNA ژنوم انسان

1میکروگرم

DNA ژنوم مخمر

10 نانوگرم

DNA ژنوم اشریشیا کلای

1 نانوگرم

DNA پلاسمید یا DNA M13

1-2پیکوگرم

ژنوم باکتریوفاژ لامبدا

20 پیکو گرم

 

بافر PCR:

شرايط يوني PH مناسب را براي واكنش PCR فراهم مي كند.این بافر با غلظت 10 برابر (x 10 ( همراه آنزیم مقاوم به دما به صورت تجاری در دسترس می باشد.جهت انجام واکنش PCR  آنزیم های متعددی وجود دارد که هر کدام بافر مخصوص خود را دارند.بافر Tris-HCL  یک بافر یونی دو قطبی است.تغییر دما در طی مراحل مختلف چرخه های PCR , این تغییر تاثیر معکوسی بر روی  Fidelity فعالیت آنزیم DNA Taq  پلیمراز دارد به طوریکه افزایش pH  باعث کاهش Fidelity میگردد و کاهشpH  باعث افزایش  Fidelity میگردد

Mgcl2.........................................................................

یون منیزیم یکی از اساسی ترین اجزا واکنش PCR می باشد. انواع مختلف آنزیم DNA polymerase برای فعالیت خود به این یون نیاز دارند و این یون برای اتصال پرایمر و قطعه DNA لازم است. برای تکثیر با Taq polymerase این یون عمدتاً به صورت ترکیب کلرید منیزیم در واکنش PCR استفاده می شود. این ترکیب گاهی در همان بافر PCR قرار داده می شود ولی از آنجا که برای برخی واکنش های PCR لازم است که غلظت این یون تغییر نماید، این ترکیب به طور جداگانه تهیه و به واکنش PCR افزوده می شود.

غلظت بهینه یون منیزیم در واکنش PCR یک تا چهار میلی مولار است. غلظت بالاتر از این مقدار باعث تکثیر قطعاتی غیر از قطعه مورد نظر (قطعات غیر اختصاصی) شده و غلظت پایین این یون نیز ممکن است به کاهش کارایی واکنش و میزان تولید قطعه مورد نظر منجر شود.

آنزیم taq.............................................................................................

آنزیم Taq polymerase
این آنزیم برای تکثیر قطعات کمتر از سه هزار جفت باز توصیه شده و پر مصرف ترین آنزیم مورد استفاده در PCR می باشد. به طور معمول حدود یک واحد از این آنزیم در 50 میکرو لیتر از واکنش PCR استفاده می شود. اگر نمونه DNA حاوی مواد ممانعت کننده PCR باشد، می توان این مقدار را دو تا سه برابر افزایش داد ولی مقادیر بالاتر آنزیم باعث تولید محصولات غیر اختصاصی می گردد. گرچه دمای مناسب برای این آنزیم 72 درجه سلسیوس می باشد ولی چون این آنزیم در دمای معمولی نیز قادر به تکثیر می باشد برای جلوگیری از اتصال قطعات پرایمر به نقاط دیگری روی توالی نمونه DNA و امکان تولید قطعات غیر اختصاصی، توصیه می شود که تمامی مراحل آماده سازی واکنش PCR بر روی یخ صورت گیرد.

نوکلئوتید ها:

چهار نوکلئوتید تشکیل دهنده قطعه DNA از اجزا واکنش PCR می باشند که به عنوان واحد های ساختمانی مورد نیاز در ساخت قطعه DNA استفاده می شوند. غلظت مورد نیاز از هر یک از نوکلئوتیدها برای واکنش PCR یکسان و برابر 200 نانو مولار می باشد. برای این منظور از مخلوط های آماده واجد هر چهار نوکلئوتید که با غلظت های مختلف مثل دو میلی مولار، 10 میلی مولار و 25 میلی مولار موجود است، استفاده می شود. به طور مثال، در یک واکنش 50 میکرو لیتری PCR باید 5 میکرو لیتر از مخلوط دو میلی مولار نوکلئوتیدها برای دستیابی به مقدار مورد نیاز در واکنش استفاده کرد.


برچسب‌ها: اجزاء PCR
+ نوشته شده در  ساعت   توسط مینا | 

روش خواندن برگه هاي آزمايش
روش بررسی همه تست های آزمایشگاهی بالینی
انواع آزمايشات
 
آزمايشات روتين شامل
الف- آزمايش خون:CBC_FBS_BS_Hb-HCT_PLT-PT-PTT-Cholestrol_Fb-Cr- BUN-Na-K-Ca-LDL-HDL-
ب- آزمايش ادرار:,UA-UC
ج-آزمايش مدفوع:گاياگ و کشت مدفوع
 
 
 
ساير آزمايشات غير روتين است و در مورد بيماران خاص استفاده مي شود شامل 
د- آزمايش مغز نخاع
و-آزمايش خلط
ه- آزمايش کشت تراشه 
ي- ساير آزمايشات
 
 
 
 
حروف اختصاصي در هر آزمايش
 
FBS                 قند خون ناشتا
MCHC            غلظت متوسط همو گلوبين
WBC               شمارش گلبول هاي سفيد
RBC                شمارش گلبول هاي قرمز
HB                   همو گلوبين
HC                  هماتو کريت( درصد گلبول هاي قرمز در خون )
HCV               حجم متوسط گلبول هاي قرمز
HCH               مقدار متوسط همو گلوبين در گلبول هاي قرمز
R.D.W            ضريب تغييرات اندازه گيري گلبول هاي قرمز
PLT                شمارش پلاکت ها
PTE               در صد پلاکت ها
MPV              حجم متوسط پلاکت ها    
MCH               وزن متوسط هموگلوبين
MCV               حجم متوسط هموگلوبين
M/E                نسبت سلول هاي زاينده گلبول سفيد به قرمز
RDW              پهناي گلبول قرمز در منحني
UA                 تجزيه کامل ادرار ( PH،رنگ ،بو،توده هاي متراکم )
TGs               تري گليسيريد   ( چربي که باعث رسوب در رگ هاو عروق مي شود )
HCG             تست حاملگي
FSB              آزمايش قند خون
             
 
 
 
انواع آزمايش هاي  خون
 
>> RBC
RBC مخفف کلمه سلول‌ قرمز خون است. اين سلول‌هاي قرمز يا همان گلبول‌هاي قرمز، در واقع اصلي‌ترين قسمت خون و عامل رنگ قرمز آن هستند. خود اين رنگ قرمز به دليل وجود ماده‌اي به نام هموگلوبين است که کمک مي‌کند گلبول‌ قرمز، اصلي‌ترين وظيفه خود يعني حمل و نقل اکسيژن و دي‌اکسيدکربن را انجام دهد. به طور خلاصه مي‌شود گفت گلبول‌هاي قرمز وسيله حمل و نقل اکسيژن از ريه به بقيه سلول‌هاي بدن هستند.مقادير طبيعي: بين ۷/۴ تا ۱/۶ ميليون در هر ميکروليتر خون. اين عدد براي خانم‌ها مقداري کمتر و در کودکان مقداري بيشتر است.
 
 
نکته:
گلبول قرمز به طور طبيعي بعد از توليد در مغز استخوان ۱۲۰ روز در خون زندگي مي‌کند و در آخر عمر خود خرد مي‌شود و به عناصر سازنده‌اش تبديل مي‌شود.
مقدار RBC‌ها در طي بارداري به طور طبيعي کمي کمتر نشان داده مي‌شود چون حجم مايع خون افزايش پيدا کرده است.
عدد RBC در واقع مقدار دقيق گلبول‌هاي قرمز در ۱ميلي‌ليتر خون محيطي است.
بسته به آزمايشگاه و نوع کيت مورد استفاده، ممکن است مقياس شمارش اين سلول فرق کند.
خوردن داروهايي مثل کلرامفنيکل هم باعث کاهش RBC مي‌شود.
 
 
 
>> HCT
هموتوکريت يا HCT هم يکي از مقادير اندازه‌گيري گلبول قرمز است. به طور کلي «هم» به معني آهن است و هر جا در هر کلمه‌اي آمد حتما آن کلمه ارتباطي با گلبول قرمز دارد. هماتوکريت درصدي از حجم کلي خون است که از گلبول قرمز ساخته شده و با اندازه‌گيري قسمت قرمز رسوب خون در لوله آزمايش نسبت به کل ارتفاع خون اندازه‌گيري مي‌شود. به خاطر بيماري‌ها و شرايط مختلفي که مي‌توانند اندازه‌گيري RBC و Hgb را با اشکال مواجه کنند، HCT هم اندازه‌گيري مي‌شود تا به طور مستقيم نشان‌دهنده اندازه هموگلوبين و گلبول قرمز در خون باشد. اين عدد معمولا با درصد نشان داده مي‌شود. مقادير طبيعي: اعداد بين ۴۲ تا ۵۲ درصد براي آقايان و ۳۷ تا ۴۷ درصد براي خانم‌ها نرمال به حساب مي‌آيد. در خانم‌هاي باردار درصد بالاتر از ۳۳ طبيعي است.
محدوده خطر: HCT بالاتر از ۶۰ درصد و پايين‌تر از ۱۵ درصد بايد باعث نگراني پزشک شود.
 
 
 
نکته:
بيماري‌هايي که باعث به وجود آمدن شکل‌هاي غيرطبيعي گلبول قرمز مي‌شوند (مثل بيماري گلبول قرمز داسي‌‌شکل) مقدار HCT را تغيير مي‌دهند.
وقتي مقدار گلبول سفيد به شدت بالا باشد بر مقدار HCT موثر است.
در صورت طبيعي بودن اندازه‌هاي گلبول قرمز، مقدار هماتوکريت ۳ برابر هموگلوبين است.
هماتوکريت را نبايد بلافاصله بعد از خون‌ريزي شديد اندازه‌گيري کرد.
 
 
 
 
>> WBC
اين سه حرف مخفف «سلول‌هاي سفيدخون» و نشان‌دهنده گلبول‌هاي سفيد است. اندازه‌گيري مقدار گلبول‌هاي سفيد خون يکي از روش‌هاي اصلي تعيين وجود عفونت در بدن است چون اين سلول‌ها که جزو سيستم دفاعي بدن هستند در شرايط بيماري‌هاي عفوني و غيرعفوني واکنش‌هاي مختلفي از خود نشان مي‌دهند.
شمارش WBCها دو جزء دارد. يکي مقدار کلي گلبول‌هاي سفيد در يک ميلي‌ليتر خون و جزء ديگر شمارش جزء به جزء اين سلول‌ها چون گلبول‌ سفيد خود متشکل از پنج نوع مختلف است که کم و زياد شدن هر کدام از اين انواع معني خاص خود را دارد. کلمه «diff» که در جلوي CBC به معني آزمايش خون نوشته مي‌شود درخواست براي شمارش همين انواع مختلف گلبول‌سفيد است.مقادير طبيعي: در بزرگسالان و بچه‌هاي بالاتر از ۲ سال مقدار گلبول‌سفيد بين ۵ تا ۱۰ هزار در هر ميلي‌ليتر خون طبيعي است.
محدوده خطر: WBC کمتر از ۲۵۰۰ و بيشتر از ۳۰۰۰۰ هر کدام نشان‌دهنده بيماري‌هايي هستند که مي‌توانند گاهي خطرناک باشند.
 
 
 
نکته:
عمل اصلي گلبو‌ل‌سفيد مبارزه با عفونت و حذف عوامل خارجي و مزاحم است و در مواقع آلرژ‌ي‌ها هم اين سلول‌ها مسوول بروز واکنش هستند.
تغيير هر کدام از انواع WBC معني خاص خود را دارد و ممکن است نشان‌دهنده عفونت با ميکروب، ويروس و يا حتي استرس باشد.
فعاليت شديد بدني و ورزش سنگين هم براي مدتي باعث بالا رفتن تعداد WBC در خون مي‌شود. بارداري و زايمان هم اين مقدار را افزايش مي‌دهند.
 
 
 
>> Hgb
در برگه‌هاي آزمايش مختلف ممکن است به صورت‌هاي مختلف HGB،Hg، يا Hgb نوشته شود. هم اينها مخفف کلمه هموگلوبين، يکي از عناصر اصلي تشکيل دهنده گلبول‌ قرمز است. اين ماده که در آن آهن به کار رفته خود از اسيد آمينه تشکيل شده و جايگاه‌هاي مختلفي براي ترکيب با اکسيژن دارد. هموگلوبين در جايي که اکسيژن زياد وجود دارد با آن ترکيب مي‌شود و در محيط کم اکسيژن آن را آزاد مي‌کند.اندازه‌گيري مقدارکلي هموگلوبين در واقع نوعي نشان‌هنده تعداد گلبول‌هاي قرمز است.مقادير اصلي: مقدار طبيعي براي آقايان بين ۱۴ تا ۱۸ گرم در هر دسي‌ليتر است و براي خانم‌ها مقادير بين ۱۲ تا ۱۶ گرم در هر دسي‌ليتر طبيعي محسوب مي‌شود.
محدوده خطر: هموگلوبين زير ۵ و بالاي ۲۰ مقادير بحراني به حساب مي‌آيند و حتما نيازمند رسيدگي فوري هستند.
 
 
 
 
نکته:
مقدار Hgb در بارداري کاهش مي‌يابد چون با اينکه خون‌سازي کمي بيشتر شده است اما حجم مايع بدن و خون بالا رفته و مقدارکلي هموگلوبين در هر دسي‌ليتر آن کاهش مي‌يابد.
زندگي در ارتفاع هم به خاطر نياز بيشتر بدن به اکسيژن و کمبود اکسيژن محيط باعث توليد بيشتر هموگلوبين مي‌شود.
در طحال اغلب سلول‌هاي پيرخون تخريب مي‌شوند. بزرگ شدن طحال يعني تخريب بيشتر سلول‌ها و به همين دليل به دنبال آن کاهش RBC و Hgb رخ مي‌دهد.
 
 
 
>> Plt
پلاکت‌ها، اجزاي کوچک ديسک شکلي هستند که در خون وجود دارند و از بقيه سلو‌ل‌هاي خوني بسيار کوچک‌ترند. اين ساختارها حاوي آنزيم‌هايي هستند که باعث انعقاد خون مي‌شوند و وظيفه اصلي آنها جلوگيري از خون‌ريزي و خارج شدن گلبول‌قرمز از داخل رگ است.
Plt نشان‌دهنده تعداد پلاکت‌ها در هر ميلي‌ليتر مکعب خون است و عدد مربوط به آن معمولا بزرگ‌ترين عدد برگه آزمايش خون است.
به غير از کنترل سيستم انعقادي خون، از ميزان پلاکت براي بررسي روند بهبود نارسايي مغز استخوان و بيماري‌هاي خوني هم استفاده مي‌شود.مقادير طبيعي: پلاکت بين ۱۵۰ هزار تا ۴۰۰ هزار در هر ميلي‌مترمکعب خون براي بزرگسالان طبيعي است. در نوزادان اين مقدار کمي بيشتر است.
محدوده خطر: پلاکت زير ۵۰‌ هزار يا بيشتر از يک ميليون کاملا غيرطبيعي است و نيازمند توجه ويژه است.
 
 
 
نکته:
ورزش شديد و قدرتي باعث افزايش ميزان پلاکت مي‌شود. در هنگام قاعدگي مقدار پلاکت کمي کاهش پيدا مي‌کند.
قرص‌هاي ضدبارداري باعث بالا رفتن مقدار پلاکت مي‌شوند. در حالي که استامينوفن پلاکت را کاهش مي‌دهد.
صبح آزمايش خون بدهيد
 
 
 
 
آزمايش گروه هاي خوني
در پلاسماي خون انسان عناصري وجود دارند که به آنها” آگلوتاسيون” مي گويند واين خاصيت را دارند که اگر سلول خوني خارجي وارد خون شود آنها را به هم چسبانده و منعقد و بالاخره متلاشي مي کند.خون اشخاص به چهار گروه تقسيم مي شوند
گروه خونيA:- پلاسماي اين گروه داراي آگلوتين مخصوص براي به هم چسباندن گويچه هاي گروه B است.
گروه خوني B: – پلاسماي اين گروه داراي آگلوتين مخصوص براي به هم چسباندن گويچه هاي گروه A است.
گروه خونيAB: – پلاسماي اين گروه داراي آگلوتين مخصوص براي به هم چسباندن گويچه هاي گروهAB است.
گروه خونيO: - پلاسماي اين گروه داراي آگلوتين مخصوص براي به هم چسباندن گويچه هاي گروه O است.
 
 
 
وقتي به بيماري خون تزريق مي شود بايد آن خون هم کروه بيمار باشد و يا از نوعي باشد که عمل آگلوتاسيون بين خون بيمار و خون دهند موجود باشد(آزمايش کراسمچ)در اين حالت خون داده شده با خون بيمار موافق است.
هر گروه خوني مي تواند از هم گروه خون دريافت کند
گروه خوني O مي تواند به تمام گروههاي ديگر خون بدهد و دهنده همگاني است
گروه خونيAB: مي تواند از همه گروهها خون بگيرد و گيرنده عمومي است ولي به هيچ گروه ديگر جزخودش نمي تواند خون بدهد
گروه AوB فقط به هم گروه خود و گروه AB مي توانند خون بدهند
 
 
 
صرفنظر از اين موضوع عوامل ديگري از جملهRh در تطبيق خون شخصي به خون ديگر مهم است
مشاهده شده که اگر خون انسان را با خون نوعي ميمون به نام رزوس مخلوط کنند گاهي ممکن است اگلوتاسيون انجام شود و گاهي انجام نمي شود .اگر انجام شودRh مثبت و اگر انجام نشودRh منفي استعامل رزوس در خون بعضي افراد وجود دارد و برخي وجود ندارد که به آن Rh مثبت يا منفي مي گويند.اين عمل از طريق ارث منتقل مي شود .اگر پدري Rh مثبت و مادر Rh منفي باشد فرزند آنها ممکن است اين عامل را از پدر يا مادر به ارث برده و خونش Rh مثبت باشد خونش با مادر غير موافق است که منجر به عوارض شديدي براي فرزند مي شود.امار نشان ميدهد که ۱۵ درصد مردم جهان Rh منفي و بقيه Rh مثبت هستند.
 
 
 
آزمايش قند خون
اين ماده منبع اصلي تأمين انرژي در تمام موجودات زنده است. براي اندازه گيري قند خون فرد حتما بايد ناشتا باشد، به همين دليل واژه Fasting به کار مي رود، يعني بعد از مدت کوتاهي گرسنگي قند خون اندازه گيري شده است. اين مدت حدود ۱۰ تا ۱۲ ساعت مي باشد.
اگر سطح قند خون فردي بعد از ۱۲ ساعت ناشتا بيشتر از ۱۰۵ ميلي گرم در دسي ليتر باشد، نشان دهنده استعداد ابتلاء وي به ديابت در طي ده سال آينده است.
ميزان نرمال قند خون بين حداقل ۶۵ تا ۷۰ و حداکثر ۱۰۰ تا ۱۱۰ در محدوده بالا مي باشد، البته افزايش خفيف قند خون ممکن است در اثر دريافت اخير فرد باشد، اما اگر در آزمايشات مکرر ميزان آن تغييري نکرد، فرد نياز به توصيه هاي رژيمي براي پيش گيري از ابتلا به ديابت در آينده دارد.
 
 
 
 
>>> آزمايش چربي خون 
آزمايش چربي خون شامل اندازه گيري کلسترول کل، کلسترول HDL (خوب)، کلسترول LDL (بد) و تري‌‌گليسريد مي‌شود.
 
>> آزمايش خون
براي اندازه‌گيري دقيق چربي‌هاي خون بايد ۹ تا ۱۲ ساعت پيش از خون گرفتن، چيزي به جز آب نخوريد و ننوشيد.
تري‌گليسريد نوعي از چربي خون است که در اثر مصرف مواد قندي و نشاسته اي بالا مي‌رود.
کلسترول خون هم با مصرف چربي هاي غذايي مثل کره، چربي هاي گوشت، تخم مرغ و مواد لبني پرچرب، روغن هاي جامد و مايع، غذاهاي سرخ شده و … زياد مي شود.
 
>> مقادير کلسترول و تري گليسريد خون
ميزان کلسترول و تري‌گليسريد خون معمولا به “ميلي‌گرم در دسي‌ليتر” اندازه‌گيري مي‌شوند.
اين جدول‌ها ميزان‌هاي طبيعي و غيرطبيعي انواع چربي‌هاي خون را نشان مي‌دهد.
 
> ميزان کل کلسترول (ميلي‌گرم در دسي‌ليتر)—تفسير
کمتر از ۲۰۰— مطلوب
۲۰۰ تا ۲۳۹— حد مرزي بالا
۲۴۰ و بالاتر— بالا
 
 
> کلسترول بد يا LDL (ميلي گرم در دسي‌ليتر)—- تفسير
کمتر از ۷۰ —-مطلوب براي افراد در معرض خطر بسيار بالاي بيماري قلبي
کمتر از ۱۰۰—-مطلوب براي افرادي در معرض خطر بيماري قلبي
۱۰۰ تا ۱۲۹ —-نزديک به طبيعي
۱۳۰ تا ۱۵۹ —-حد مرزي بالا
۱۶۰ تا ۱۸۹ —- بالا
۱۹۰ و بالاتر —- بسيار بالا 
 
 
> کلسترول خوب يا HDL (ميلي‌گرم در دسي‌ليتر)—— تفسير
مردان: کمتر از ۴۰—— بد
زنان :کمتر از ۵۰—— بد
۵۰ تا ۵۹ —— بهتر۶۰ و بالاتر —— بهترين
 
 
> تري‌گليسريد (ميلي گرم در دسي‌ليتر)———-تفسير
کمتر از ۱۵۰——— مطلوب
۱۵۰ تا ۱۹۹——— حد مرزي بالا
۲۰۰ تا ۴۹۹——— بالا
۵۰۰ و بالاتر——— خيلي بالا
 
 
 
 
الکتروليتهاي موجود در خون اندازه گيري الکتروليت هايي همچون پتاسيم،سديم،کلر و گازکربنيک در خون معمولا در در شرايطي همچون ديابت کنترل نشده،COPD،بيماري کليوي،بيماراني که گاواژ ميشوند ، بعضي اختلالات داخلي ، آسيب ، ورم و اسيدوز/آلکالوز انجام ميشود.   پتاسيم:K بدن به تغيير مقدار پتاسيم بسيار حساس است. با بالا يا پايين رفتن پتاسيم، آريتمي قلبي يا آسيب هاي عصبي اتفاق مي افتد. مقادير نرمال آن در خون۵- ۳٫۶ ميلي اکي والان در ليتر است.
کاهش پتاسيم خون(هايپوکالمي) در مواردي همچون کاهش دريافت غذايي و در وضعيت کاتابوليک ، اسهال، استفراغ ،سيروز کبدي و يا آسپيراسيون رخ ميدهد.علاوه بر اين مصرف بعضي داروها همچون داروهاي مدر و شيرين بيان نيز باعث کاهش سطح پتاسيم خون ميشوند.
افزايش پتاسيم خون (هايپرکالمي) در اثربيماري کليوي، آسيب هاي ناشي از تصادفات،عفونت و خون ليز شده اتفاق مي افتد.مصرف داروهايي همچون ممانعت کننده هاي ACE نيز باعث افزايش پتاسيم ميشوند.    سديم:Naسديم مهمترين يون در مايع خارج سلولي است و به خاطر خاصيت احتباس دهنده آب ، ارزشمند است. مقادير نرمال آن در خون ۱۳۵-۱۴۵ mEq/L است. اين الکتروليت در بدن نقشهاي زيادي اعمال ميکند. از جمله : فعاليت آنزيمها،کنترل اسمولاليته مايعات داخل عروقي، کنترل تعادل اسيد و باز، هدايت ايمپالسهاي عصبي ماهيچه اي از طريق پمپ سديم (همزمان با خارج شدن پتاسيم ، سديم وارد سلول ميشود) و …
کاهش سطح سديم خون (هايپوناترمي)،در اثر از دست دهي سديم يا احتباس آب يا هردو رخ ميدهد. به عنوان مثال اسهال،استفراغ،تعريق زياد، تزريق مداوم سرم قندي ۵% ،رژيم کم نمک، سوختگي، واکنشهاي التهابي، آسيب بافت ها و …      تست بررسي سديمانتاسيون گلبولهي قرمز (ESR)تست بررسي سديمانتاسيون گلبولهاي قرمز خون( ESR )يکي از تستهاي رايج در آزمايشگاه هاي تشخيص طبي ميباشد که بنا به درخواست پزشک براي بسياري از بيماران انجام ميشود. اين تست يک تست ارزان قيمت و البته غير اختصاصي ميباشد که نتايج آن همراه با نتايج ساير تستها ارزشمند و کمک کننده ميباشد. ESR تحت شرايطي مانند بيماري هاي اتو ايميون به ويژه روماتيسم مفصلي، در عفونتها، التهابات حاد و مزمن و سرطانها افزايش ميابد بنابراين با تنها افزايش ميزان رسوب گلبولهاي قرمز به تشخيص دقيقي نميتوان دست يافت.سرعت رسوب گبولهاي قرمز خون بر حسب ميليمتر بر ساعت ميباشد. در اين تست خون گرفته شده همراه با ضد انعقاد سيترات سديم در لوله هاي بلند و باريکي کشيده شده و به صورت عمودي روي پايه هاي سديمان قرار داده ميشود. پيپت هاي ESR پيپت هاي بلندي هستند که از قسمت سر به انتها از ۰ درجه بندي شده اند. خون داخل پيپت ها تا عدد ۰ کشيده شده و بعد از طي ۱ ساعت ميزان رسوب گلبولها از عدد ۰ تا جايي که پلاسما شفاف وجود دارد خوانده ميشود.   موارد درخواست تست: اين تست در موارد مشاهده علائمي مبني بر التهابات و يا بدخيمي ها و همچنين علائم مربوط به رماتيسم مفصلي مانند درد و ورم مفاصل در خواست ميشود. لازم به ذکر است که با توجه به غير اختصاصي بودن اين تست حتما همراه با ساير تستهاي ارزشمند و کمک کننده به تشخيص نهايي مانند الکتروفورز پروتئينهاي سرم، اندازه گيري فيبرينوژن و … بنا به علائم بيمار درخواست ميشود. همچنين بعد از تشخيص بيماري اين تست به منظور ارزيابي ميزان پاسخ به درمان در فرد بيمار به صورت دوره اي درخواست ميشود. کاهش ESR از مقدار قبلي نشانه از بهبودي و افزايش مجدد آن نشانه اي از عود بيماري ميباشد.مقدار نرمال ESR در مردان تا ۱۰ و در زنان تا ۲۰ ميليمتر بر ساعت ميباشد.    
CRP CRP يکي از پروتئينهاي فاز حاد بوده که مانند ESR يک تست ارزشمند در موارد التهابات محسوب ميشود و حتي ميتوان گفت که اين تست از ESR ارزشمندتر ميباشد زيرا به محض بروز هر گونه التهابي در بدن افزايش يافته و به مجرد کاهش التهاب و بهبودي ميزان آن کاهش ميابد بنابر اين علي رغم غير اختصاصي بودن از حساسيت خوبي برخوردار ميباشد. بنابراين همراه با تست ESR تست CRP نيز انجام ميشود. ساير تستهاي همراه با ESRبنا به علائم بيمار شامل تست RF به منظور بررسي رماتيسم مفصلي, تست ANAو ساير تستهاي اتوايميون به منظور بررسي اختلالات اتوايميون، اندازه گيري سطح فيبرينوژن ، الکتروفورز پروتئين سرم، CBC و ساير تستها ميباشد.    موارد افزايش ESR: افزايش ESR نشانه اي از افزايش گلبولينها و يا فيبرينوژن پلاسما بوده و نياز به بررسي هاي بيشتري دارد. ۱- افزايش خفيف در التهابات خفيف و جزئي، حاملگي و آنمي. در آنمي ها به دليل اينکه ميزان گلبولهاي قرمز کم ميشود دافعه بين اين سلولها کمتر از حالت عادي شده و بنابراين ميزان رسوب افزايش ميابد حال اينکه در پلي سيتمي به دليل افزايش در تعداد اريتروسيتها دافعه بين سلولي بيشتر شده و اين امر باعث کاهش رسوب و کاهش ESR ميگردد. ۲- افزايش شديد اين تست ميتواند بيانگر افزايش در پروتئين هاي خون از جمله گلبولينها باشد. افزايش گلبولينها در مواردي مانند عفونتها، مولتيپل ميلوما، ماکروگلبولنمي والدنشتروم ( در اين مورد حتي در غياب التهاب افزايش ESR باز هم ديده ميشود.) و رماتيسم مفصلي ديده ميشود. ۳-در زنان معمولا ميل به افزايش در ESR بيشتر بوده و در دوران قاعدگي و بارداري ميزان آن افزايش ميابد. ۴- داروها شامل دکستران، متيل دوپا، تئوفيلين، پنيسيلين پروکايناميد و داروهاي پيشگيري از بارداري خوراکي باعث افزايش ESR ميگردند. *کاهش ESR معمولا حالت مهمي نبوده و گاهي در موارد پلي سيتمي، لکوسيتوز و ناهنجاري گلبولهاي قرمز مانند سيکل سل ديده ميشود. همچنين داروهايي مانند آسپيرين، کورتيزون و کينيون باعث کاهش ESR ميگردند.     CBCCBC حروف اول سه کلمه انگليسي زير است.  کامل=C) COMPLETE)، خونBLOOD B)) ، شمارشCOUNT= C)) درنتيجه : CBCبه معناي شمارش کامل گويچه هاي خون است     > CBCشامل :۱- شمارش تعداد گويچه هاي سفيد خون در ميلي متر مکعب ازخون  (WBC)-  ۲٫شمارش تعداد گويچه هاي قرمز خون در ميلي متر مکعب ازخون (RBC ) ۳- شمارش تعداد پلاکت هاي خون در ميلي مترمکعب ازخون platelet count- ۴- شمارش افتراقي گويچه هاي سفيد خو ن( تعيين Diff) -Count white blood cell differential  ۵ – اندازه گيري مقدارهماتوکريت خون - (HCT)  ۶- تعيين مقدار مقدارهموگلوبين خون (HGB) ۷- تعيين انديکس هاي (index) گويچه هاي قرمز خون      RBC Indexالف: تعيين ميانگين حجم يک گويچه قرمز (A- (MCV ب: تعيين ميانگين مقدار هموگلوبين در يک گويچه قرمز و غيره…..(B – (MCH ج : گزارش مرفولوژي گويچه هاي قرمزخون C -Red Blood Cell morphology report D -Immature cells report  د: گزارش سلولهاي نارس ه: گزارش انگل خوني از جمله انگل مالاريا در صورت مشاهده E – Malaria Parasit report آزمايش CBC به طور کامل توسط کارشناس آزمايشگاه انجام مي گردد که نتيجه آن بسيار ارزشمنداست    
تفســــير آزمـــايش کامل ادرار
آزمايش کامل ادرار UA آزمايش ساده ومهم و گاهي وسيله اي کليدي براي تشخيص بيماري هاي کليوي و اورولوژيک مي باشد. اين آزمايش شامل بررسي فيزيکي، شيميايي و ميکروسکوپي مي باشد. گاهي همين آزمايش ساده و راحت اطلاعات بسيار مهم و الزامي براي تشخيص بيماران را فراهم مي آورد. در تمام بيماران اورولوژي و نفرولوژي U/A الزامي است. با اين حال اين آزمايش چنانچه به درستي تفسير نشود ، مي تواند باعث گمراهي پزشک شود.آزمايش کامل ادرار توسط (dipsticks) و ميکروسکوپي انجام مي شود، خصوصيات فيزيکي ادرار نيز ذکر مي گردد.
 
 
 
>> در اين قسمت خلاصه اي از اين موارد ذکر ميگردد
 
الف)خصوصيات فيزيکي
۱- رنگ ادرار ـ ادرار طبيعي به رنگ زرد کم رنگ (pale yellow) است که به علت پيگمان يوروکروم(urochrom) مي باشد. دلايل تغيير رنگ ادرار عبارت اند از: ميزان غلظت ادرار، خوراکي ها ، دارو ها، توليدات متابوليسم بدن، عفونت ادراري.در صورت تغيير رنگ ادرار بايد، تمام اين موارد بررسي شوند. سندروم کهنه ي قرمز(red diaper syndrome)به علت باکتري سراشيا مارسسنس مي باشد که باعث نگراني مادران مي گردد.
 
2-توربيديتي (شفافيت) ـ ادرار تازه شفاف است و شايع ترين علت کدري آن فسفاتوري است. در موارد کريستال فسفات اضافي در ادرار قليايي شروع به رسوب مي کنند، معمولا متناوب هستند و پس از مصرف غذا يا مقادير زياد شير رخ مي دهد. بيمار بي علامت بوده و چنانچه ادرار با اسيد استيک (سرکه) اسيدي شود، شفاف خواهد شد. از طرف ديگر در آزمايش ميکروسکوپي کريستال هاي فسفات آمورف ديده خواهد شد.علت ديگر کدري ادرار پيوري است که حضور تعداد زياد WBC در ادرار و بوي تند و زننده باعث افتراق آن از ساير علل خواهد شد.از علل نادر کدري ادرار کايلوري است که ناشي از ارتباط غير طبيعي سيستم لنفاوي و ادراري ميباشد.
 
3-وزن مخصوص ادرار ـ با(dipsticks) يا با وسيله ي اپتيک خاصي انجام مي گردد. محدوده ي آن از۰۰۱/۱تا۰۳۵/۱ مي باشد. وزن مخصوص ادرار معمولا نشان گر وضعيت هيدريشن بيمار است؛ ولي، مي تواتند، ناشي از عمل کرد غير طبيعي کليه نيز باشد. وزن مخصوص طبيعي بين ۰۰۸/۱ تا ۰۲۰/۱ است، اگر، زير ۰۰۸/۱ باشد، رقيق است و اگر بالاي ۰۲۰/۱ باشد غليظ مي باشد. اگر در چند آزمايش متوالي ۰۱۰/۱ باشد، تشخيص CRF يا ARF مطرح است.
 
· علل کاهش وزن مخصوص ادرار
i. مصرف مايعات زياد
ii. مصرف دارو هاي مدر
iii. ديابت بي مزه
iv. کاهش توانائي کليه درتغليظ ادرار
 
 
 
· علل افزايش وزن مخصوص ادرار
i) کاهش مصرف مايعات
ii) ديابت شيرين
iii) دهيدريشن به علت تب ، تعريق،استفراغ،اسهال
iv) ترشح نابجايADH
v) تزريق مواد کنتراست ( پس از IVP ميتواند تا ۰۳۵/۱ برسد)
 
علت اسمولاريته ادرار، مواد محلول آن است و از ۵۰ تا ۱۲۰۰ ميلي اسمول در ليتر متغير است. اسمولاريته نيز، تحت تاثير هيدريشن و عوامل موثر بر وزن مخصوص ادرار قرار مي گيرد. نسبت به وزن مخصوص اسمولاريته ادرار نمايش گر بهتري از کار کليه مي باشد، ولي، توسطdipsticks قابل انجام نيست.
۴- pH ادرار ـ توسط dipsticks چک مي شود. PH ادرار از ۵/۴ تا ۸ متغير است. متوسط آن در حالت طبيعي ۵/۵تا۵/۶ است. اگر زير ۵/۵ باشد، اسيدي و اگر بالاي ۵/۶ باشد، قليايي در نظر گرفته مي شود. در کل pH ادرار نشان گر pH سرم است، مگر، در موارد خاصي مثل RTA وبيماري هاي خاص کليه که قدرت اسيدي کردن ادرار مختل است.عدم توانايي کليه در اسيدي کردن ادرار به ميزان زير ۵/۵ پس از لود اسيد برايRTA تشخيصي است.درUTI چنانچه ادرار قليايي باشد، احتمالا، عامل آن باکتري هاي اوره آز مثبت مثل پروتئوس مي باشد. اين باکتري ها با اين آنزيم اوره ادرار را به آمونياک تبديل مي کنند.در تشکيل سنگ هاي ادراري pH موثر است. سنگ هاي سيستيني و اسيد اوريکي در ادرار اسيدي ايجاد شده و قليايي کردن ادرار به درمان و پيشگيري آن ها کمک مي کند.
 
 
 
ب) آزمايش شيميايي ادرار
Dipsticks يک روش آسان، سريع و ارزان مي باشد. موادي که با اين روش چک مي شود شامل خون، پروتئين، گلوکز، کتون، يوروبيلينوژن، بيليروبين، و گلبول سفيد هستند.با اين حال چون اين آزمايش بر پايه کلرومتري (رنگ) مي باشد، هر رنگ اضافي ادرار مثل فنازوپيريدين در اين آزمايش اختلال ايجاد مي نمايد.مصرف ويتامين ث زياد منجر به تداخل در واکنش اکسيداسيون شده و منفي کاذب را در گلوکز و بيليروبين باعث مي گردد.ادرار بيش از حد قليايي منجر به مثبت کاذب پروتئين و از طرفي پايين خوانده شدن وزن مخصوص ادرار مي گردد. اگر Dipsticksتاريخ گذشته باشد يا براي مدت طولاني در معرض هوا قرار گرفته باشد، خراب شده و نتيجه آزمايش قابل قضاوت نخواهد بود.
 
1) هماچوري ـ حضور RBC بيش از ۳ عدد در ادرار سانتريفوژ شده را هماچوري مي نامند که Dipsticks حساسيت بيش از ۹۰% براي شناسايي آن دارد. ولي، اختصاصيت آن به علت مثبت کاذب بالا پايين است. حضور گلبول قرمز، هموگلوبين و ميوگلوبين آنرا مثبت مي کند. براي افتراق آن ها از هم ابتدا آزمايش ميکروسکوپي انجام مي شود، اگر، گلبول قرمز ديده شد، تشخيص هماچوري است؛ اگر، ديده نشد، بايد خون بيمار سانتريفوژ شود. اگر سرم بيمار قرمز يا صورتي بود، هموگلوبينوري و اگر شفاف بود ميوگلوبينوري مطرح است. علل هماچوري مثبت کاذب شامل آلودگي ادرار با خون قاعدگي و دهيدريشن و ورزش مي باشد.هماچوري مي تواند، نفرولوژيک يا اورولوژيک باشد. در موارد نفرولوژيک RBC ديس مورفيک و چروکيده و اکثرا همراه پروتئينوري واضح و گاهي کست RBC و ghost cells (RBC که حين عبور از لوله هاي جمع کننده کليه هموگلوبين خود را از دست داده اند) است. در هماچوري اورولوژيک حداکثر پروتئينوري ۲+يا ۳+ (۱۰۰-۳۰۰ ميليگرم در ميلي ليتر) است و گلبول هاي قرمز گرد و با هموگلوبين يکنواخت هستند.
 
2) پروتئينوري ـ روزانه يک فرد بالغ بين ۸۰تا ۱۵۰ميلي گرم پروتئين از ادرار دفع مي کند. پروتئينوري مي تواند ناشي از بيماري هاي رنوواسکولار، گلومرولار، توبولواينتراستيشيل و يا سرريزي(overflow) پروتئين غير طبيعي سرم باشد. پروتئين ادرار تحت تاثير هيدريشن مي باشد. ولي، هيچ گاه در اين حالت بيش از ۲۰ ميلي گرم در دسي ليتر نخواهد شد. ولي، برعکس در پروتئينوري پاتولوژيک اگر مصرف مايعات خيلي زياد باشد، مي تواند، به زير ۲۰ ميلي گرم در دسي ليتر هم برسد . آستانه ي تشخيص آن در ادرار با dipsticks 30-20 ميلي گرم در دسي ليتراست، ميزان کمتر از۱۵۰ ميلي گرم در دسي ليتر پروتئين نرمال در نظر گرفته مي شود.پروتئين ادرار شامل تام هاسفال (۴۰%)، گلوبولين هاي سرم (۳۰%) و آلبومين (۳۰%) است.علل منفي کاذب د ر dipsticks شامل ادرار شديدا قليائي، ادرار رقيق، حضور پروتئيني غير از آلبومين است.
 
3) کتون و گلوکز: به علت باز جذب گلوکز در لوله هاي پروگزيمال نفرون نبايد، در افراد نرمال گلوکز ادرار مثبت باشد. حد نهايي باز جذب در ادرار در بالغين ۱۸۰ ميلي گرم در دسي ليتر و در کودکان و نوزادان ۱۲۰ ميلي ليتر در دسي ليتر است. ساير قندها در dipsticks قابل شناسايي نيستند.
۴) بيليروبين و اروبيلينوژن: بيليروبين غير کونژوگه در ادرار ديده نمي شود و فقط در صورت افزايش نوع کونژوگه ي آن در سرم، در ادرار ظاهر مي گردد. ولي، اروبيلينوژن به مقادير بسيار کمي در ادرار يافت مي گردد. در گردش هپاتوبيلياري بيليروبين کونژوگه در روده ي کوچک پس از تاثير باکتري هاي روده روي آن بازجذب شده که مقادير کم آن از طريق ادرار به نام اوروبيلينوژن دفع مي گردد. ۵۰% اروبيلينوژن از ادرار و نيم ديگر از مدفوع دفع مي گردد.مصرف آنتي بيوتيک هاي وسيع الطيف و انسداد مجاري صفراوي منجر به کاهش اروبيلينوژن خواهد شد و هموليز و بيماري کبدي برعکس باعث افزايش آن مي گردد.منفي کاذب بيليروبين ادرار در مصرف اسيد اسکوربيک زياد و مثبت کاذب آن در مصرف فنازوپيريدين ديده مي شود.
 
5) لکوسيت استراز و نيتريت: فعاليت لکوسيت استراز نشانگر حضور WBC در ادرار است و وجود نيتريت نشان گر باکتريوري است. لکوسيت استراز آنزيم توليد شده از نوتروفيل ها مي باشد. نيترات هاي ادرار توسط باکتري هاي گرم منفي تبديل به نيتريت مي شود. مهم ترين عامل مثبت کاذب اين دو آزمايش آلودگي است. براي کشف UTI هردوي اين آزمايش ها بايد انجام شود و امکان تشخيص UTI را به ۹۵% مي رسانند، ولي نياز به کشت ادراري را مرتفع نمي کنند. چنانچه نيتريت مثبت باشد، ولي لکوسيت استراز منفي، بايد، علل پيوري استريل (تومور، سنگ، TB) و UTI با باکتري هاي غير از گرم منفي مد نظر قرار گيرند.
 
ج) بررسي سديمان ادراري: ۱۰ ميلي ليتر از ادرار ميد استريم براي مدت ۵ دقيقه با سرعت ۲۰۰۰تا ۳۰۰۰ دور بر دقيقه سانتريفوژ شده، سپس، ادرار روي آن دور ريخته وته نشين آن با مقدار کم ادرار باقي مانده در ته لوله حل شده و يک قطره از آن روي لام ريخته و با بزرگنمايي X100 وX400 زير ميکروسکوپ بررسي مي گردد. گاهي براي راحت تر ديدن گلبول ها و باکتري ها با متيلن بلو رنگ آميزي مي گردد.بايد، تمام لام با بزرگ نمايي کم ديده شود و توجه روي حضور کست ها، اريتروسيت، گلبول سفيد، کريستال سيستين، ماکروفاژ، oval fat ، پارازيت ها ( تريکوموناس واژيناليس، تخم شيستوزوميا هماتوبيوم) است.با قدرت بزرگنمايي زياد، بيش تر، توجه روي شکل اريتروسيت ها (ديس مورفيک) باکتري و قارچ است.
 
 
کستهاي ادراري
کست ادراري يک انعقاد پروتئيني در توبول هاي کليوي است که محتويات توبول ها درآن گير مي کنند و بر همين اساس تقسيم مي گردد.Tamm-horsfall پروتئيني است که توليد کست مي نمايد که دراصل ماتريکس سلول هاي توبولي مي باشد.
کست هيالن: کستي فاقد هر گونه المان در داخل آن مي باشد و تماما از پروتئين تام هاسفال تشکيل شده است و پس از ورزش، در معرض گرما قرار گرفتن فرد، پيلونفريت يا بيماري هاي مزمن کليوي ديده مي شود.
کست RBC : حاوي RBC مي باشد و تشخيص هماچوري گلومرولي را مسجل مي کند و اکثرا ثانويه به گلومرولونفريت است.
کست WBC: در گلومرولونفريت ها، پيلونفريت حاد و نفريت اينتراستيشيل حاد ديده مي شود.
کست هاي گرانولر و واکسي(waxy): ناشي از دژنرسانس المان هاي سلولي ايجاد مي شود و بر بيماري توبولي دلالت دارد.
کست fatty: در سندرم نفروتيک، ليپيدوري و هايپوتيروئيديسم ديده مي شود.
 
 
 
کريستال ها
ديدن کريستال در بيماران با سنگ ادراري مهم است و مي تواند نشان گر نوع سنگ ادراري فرد باشد، به شرطي که، هم زمان بيمار کوليک کليوي داشته باشد. ديدن کريستال سيستين، استراويت و اسيد اوريک هميشه پاتولوژيک هستند. کريستال اسيد اوريک، سيستين و کلسيم اگزالات در ادرار اسيدي و کريستال فسفات کلسيم و تريپل فسفات ( استراويت) در ادرار قليايي ديده مي شوند. در اثر باقي ماندن ادرار در محيط اتاق کريستال هاي اگزالات کلسيم در آن ايجاد مي شود که اهميت کلينيکي ندارد. کريستال ها را مي توان از روي شکل شان شناسايي کرد. کريستال اگزالات به شکل دو هرم مربع القاعده که از قاعده به هم چسبيده اند و کريستال استراويت مثل درب تابوت وکريستال سيستين به شکل حلقه ۶ ضلعي بنزن و اسيد اوريک به شکل کريستال هاي پهن با اشکال گوناگون مي باشد.
 
 
باکتري
ادرار طبيعي فاقد باکتري است و ديدن باکتري در ادرار آلوده نشده نشان گر عفونت ادراري است. چون هر حجم hpf برابر۱/۲۰۰۰۰تا۱/۵۰۰۰۰ ميلي ليتر است ديدن هر باکتري در hpf برابر ۲۰۰۰۰تا ۵۰۰۰۰ باکتري در هر ميلي ليتر است و ديدن ۵ باکتري برابر ۱۰۰۰۰۰ کلوني در کشت ادرار است. باکتري هاي گرم منفي به صورت باسيل هاي گرم منفي، استرپتوکوک به صورت رشته اي از کوکسي گرم مثبت و استافيلوکوک به صورت دسته هايي از کوکسي گرم مثبت ديده مي شود.
 
 
قارچشايع ترين قارچ سيستم ادراري کانديدياآلبيکنس است که حالت جوانه زدن (budding) hyphae دارند. بيشتر در ديابت شيرين ديده مي شوند و در خانم ها با عفونت واژينال مونوليايي نيز به صورت آلودگي ادرار موجود است.
 
 
 
پارازيت ها
تريکوموناس واژيناليس يک عامل شايع واژينيت در خانم ها است که گاهي در يورتراي مردان نيز ديده مي شود، اين پارازيت به شکل سلول بزرگ با فلاژلي با حرکات تند ديده مي شود.
 
 
 
تفسير آزمايش خون
 
توضيحات: VLDL :
مخفف و مختصر شده VERY LOW DENSITY LIPOPROTEIN است که از دسته خانواده ليپوپروتين ها محسوب ميشود (شيلوميکرون –HDL- LDL) . شيلوميکرون چربي هاي غذايي را در خون حمل و نقل ميکند درحالي که VLDL چربي هاي داخلي مخصوصا کلسترول را .
 
CHYLOMICRONES :
شيلوميکرون ذراتي است حاوي پروتئين و چربي که در واقع چربي هاي غذايي را از روده به کبد و عضلات و قلب منتقل ميکند و عمدتا حاوي تريگليسريد ميباشند
 
BILIRUBIN :
ماده اي است که از کاتابوليسم هم HEME زنجيره گلوبين به وجود ميايد . چنانچه اين ماده در خون زياد شود يرقان يا زردي به وجود ميايد. يرقان ميتواند به چند علت به وجود آيد يا ناشي از هموليز شديد گلبولهاي سرخ باشد – يا ناشي از نقص هاي انزيمهاي کبدي باشد – و يا ناشي از انسداد باشد.
 
HBA1C :
در گلبولهاي سرخ انواع مختلفي از هموگلوبين ها وجود دارد که بيشترين غلظت را در افراد بالغ هموگلوبين نوع A تشکيل ميدهد اما مقدار کمي از اين نوع توسط کربوهيدراتها گليکوزيله ميشود که به آن HBA1C ميگويند اين نوع از هموگلوبين در افراد ديابتيک غلظت بيشتري دارد و در واقع نشان دهنده ميزان قند خون اين افراد طي دو سه ماه گذشته ميباشد.
 
RETIC:
مخفف و مختصر شده reticolocyte است که از دسته سلول هاي سرخ خون بحساب ميايد . بدليل نابالغ بودن در رنگ اميزي حياتي شبکه هايي از رشته هاي ريبوزومي در آن مشاهده ميشود . اين سلول ها از نظر اندازه بزرگ هستند. حضور اين سلولها درخون رابطه مستقيم با فعاليت خونسازي مغز استخوان دارد. تعيين درصد اين سلو لها درخون جهت براورد ميزان خونسازي موثر است.
PBS: مخفف و مختصر شده براي peripheral blood smear مي باشد که منظور از آن مشاهده اسمير خون محيطي است . و گزارش اشکال غير طبيعي و اندازه هاي غير طبيعي از گلبولهاي سرخ خون محيطي است.
Diff: مخفف و مختصر شده differential است که منظور از آن تعيين درصد گلبولهاي سفيد خون بصورت چشمي است .در اين ازمايش تعداد ۱۰۰ تا ۲۰۰ عدد گلبول سفيد بطور چشمي شمارش ميشود و در صد عدد انواع مختلف سلول هاي سفيد خون گزارش ميگردد.عمدتا در عفونتهاي ميکروبي نوتروفيل ها درصد بالايي پيدا ميکنند و در عفونتهاي ويروسي عمدتا درصد لنفوسيتها افزايش پيدا ميکند.
G6PD: مخفف و مختصر شده براي glucose 6 phosphate dehydrogenase است که يک نوع انزيم درونسلولي است که در گلبولهاي سرخ هم يافت ميشود اين انزيم در گلبولهاي سرخ يک انزيم کليدي جهت حفظ غشاي گلبولهاي سرخ محسوب ميشود چنانچه اين انزيم کمبود و يا ناياب باشد هموليز گلبولهاي سرخ خود بخود رخ ميدهد و فرد دچار انمي ناشي از هموليز خواهد شد.
BUN: مخفف و مختصر شده BLOOD UREA NITROGEN است سنجش اين پارامتر سرمي براي ارزيابي عملکرد کليه بسيار مفيد است . اوره يک محصول فرعي است که از متابوليسم پروتئين ها در کبد توليد مي شود و در واقع ضايعات ناشي از مصرف پروتئين ها بصورت اوره از کليه ها دفع ميگردد بنابراين شاخص خوبي جهت بررسي عملکرد کليه ميباشد.
Cr: مخفف و مختصر شده CREATININE است اين جسم آلي در بدن از ماده اي به نام کراتين فسفات حاصل ميشود که در عضلات توليد ميگردد . مقدار اين جسم در بدن افراد مختلف بستگي متناسب با توده عضلاني فرد دارد مثلا در نوزادان کمتر و در مردان بالغ با توده عضلاني زياد بيشتر. از اين تست به کمک تست BUN جهت عملکرد کليه استفاده ميشود.
AST : مخفف و مختصر شده ASPARTATAE TRANSAMINASE است . که يک آنزيم بوده و در بدن در بافتهاي مختلف وجود دارد به عنوان مثال اين انزيم در کيد – قلب – گلبولهاي سرخ و .. وجود دارد. بالا بودن اين انزيم در مقادير غير طبيعي نشانگر حضور بيماري در فرد است مانند هموليز درون عروقي – آسيبهاي کبدي ناشي از هپاتيت و يا کبد چرب – آسيبهاي قلبي.
ALT: مخفف و مختصر شده ALANINE TRANSAMINASE است همانند AST يک انزيم محسوب ميشود که در همان بافتهايي که AST وجود داد اين انزيم نيز حضور دارد و مقادير بالا ي اين انزيم مرتبط است با همان بيماري هاي که در مورد AST بيان شد.
PRO : مخفف و مختصر شده PROTEIN است . اين تست جهت اندازه گيري کل پروتئين هاي سرمي بکارگرفته ميشود . از آنجايي که در سرم تعداد متنوعي پروتئين وجود دارد و هر کدام مرتبط با بيمارهاي خاصي است لذا جهت تعيين نوع پروتئين مذکور ميبايست تست ديگري به نام پروتئين الکتروفورز انجام گردد تا مشخص گردد که افزايش يا کاهش مربوط به کدام نوع پروتئين سرمي است.
MCH : مخفف و مختصر شده MEAN CORPOSCULAR OF HEMOGLOBIN است و بيانگر ميزان متوسط هموگلوبين در هر سلول است.براساس واحد پيکوگرم بيان ميشود.
MCHC : مخفف و مختصرشده براي MEAN CORPOSCULAR HEMOGLOBIN CONCENTRATION است و بيانگر ميزان غلظت متوسط هموگلوبين در سلول قرمز است. اين اندکس گلبول سرخ با ميزان رنگدانه هموگلوبين مرتبط است و به اصطلاح گلبول سرخ را هايپرکروم و يا هيپوکروم مي گويند.
RDW: مخفف و مختصر شده براي RED BLOOD CELL DITRIBUTION WIDTH است . اندازه اين عبارت نشاندهنده ميزان يکنواختي و يا عدم يکنواختي اندازه گلبولهاي سرخ خون است. که هر چه اين عدد کمتر باشد به معني آنست که گلبولهاي سرخ خون يکدست تر است از نظر اندازه و برعکس اگر اين عدد بزرگتر باشد نشانه عدم يک دست بودن گلبولهاي سرخ خون است و مرتبط با بعضي بيماري ها ست. براي شک به آنيزوسايتوزيس و پويکيلوسايتوزيس مي توانيد به سراغ اين اندکس گلبول سرخ برويد.
Lym : مخفف و مختصر شده براي کلمه LYMPHOCYTE است که از نظر تعداد از گلبولهاي سفيد مهم خون ميباشد و کاهش يا افزايش در ميزان اين سلول خوني هم مرتبط با بيماري هاي غالبا ويروسي است اگرچه با بيماري هاي ديگري نيز مرتبط است.
NEU: مخفف و مختصر شده براي کلمه NEUTROPHIL است که از ديگر گلبولهاي سفيد مهم خون است و افزايش و کاهش در تعداد آن مرتبط با بيماري هاي غالبا عفوني و باکتريايي مي باشد اگرچه با بيماريهاي ديگري نيز ارتباط دارد.
CBC : مخفف CELL BLOOD COUNT است و اشاره به شمارش و اندازه گيري تمام مقادير قابل اندازه گيري و قابل محاسبه خون دارد . که شاملWBC – RBC – HCT-HGB-PLT-MCH-MCV-MCHC-MPV-RDW-……. دارد.
WBC: مخفف WHITE BLOOD CELL است و اشاره به تعداد و شمارش سلولهاي سفيد خون دارد که شامل نوتروفيل – منوسيت – لنفوسيت – بازوفيل – ائوزينوفيل مي شود.
RBC: مخفف RED BLOOD CELL است و منظور از آن تعداد گلبولهاي قرمز خون مي باشد.
HGB: مخفف HEMOGLOBIN است و منظور از آن ميزان رنگدانه خون انسان است که مقدار آن در خون نشاندهنده کم خوني يا پرخوني و يا طبيعي بودن خون فرد است .
PLT: مخفف PLATELET بوده و به تعداد سلول هايي به نام پلاکت در خون اشاره دارد. اين سلول هاي در انعقاد خون نقش دارند. و تعداد آنها مرتبط با بيماريهاي انعقادي خون مي باشد.
HCT : مخفف HEMATOCRIT مي باشد و بيانگر نسبت حجم سلولي خون و بخش مايع خون مي باشد.
MCV : مخفف MEAN CORPOSCULAR VOLUME است و به ميانگين حجم گلبولهاي سرخ خون اشاره دارد.
 
 
 
برگه آزمايش کامل ادرار شامل اطلاعاتي است که هر کدام را به اختصار توضيح مي دهيم :
Colour : دامنه تغييرات رنگ ادرار گسترده بوده و عمدتا وابسته به غلظتش ميباشد .رنگ ادرار از زرد کمرنگ ( Light yellow ) تا کهربايي تيره ( Dark yellow ) متغير است. بسياري از داروها و مواد غذايي ميتوانند رنگ ادرار را تغييردهند.اما برخي رنگهامثل قرمز(در هماچوري يا پورفيرينوري ) ، سياه ( مثلا در آلکاپتونوري )،نارنجي ( بيليروبينوري ) ، سفيد ( چرک فراوان ) و يا آبي تا سبز ( عفونت سودومونايي ) ممکن است مهم باشند و با پيگيري دليل آنها ميتوان به تشخيصهاي مهمي دست يافت .Appearance ( ظاهر ادرار ) : ادرار نرمال معمولا شفاف است اما ممکن است به واسطه رسوب فسفاتها يا اوراتها، کدر((Turbid يا نيمه کدر( semiturbid ) گردد. حضور گلبولهاي سفيد يا قرمز، اپي تليالها و باکتريها نيز در ميزان خاصي ميتوانند ادرار را کدر يا نيمه کدر کنند . موکوس نيز ميتواند نماي مه آلود ( cloudy) به ادرار بدهد.
وزن مخصوص ( specific gravity ) : شاخص غلظت مواد محلول در ادرار است که براي سنجش قدرت تغليظ و رقيق کردن کليه ها به منظور حفظ و بقاي هموستاز به کارميرود. حدود طبيعي آن براي ادرار راندوم ۰۰۳/۱تا ۰۳۵/۱و براي ادرار ۲۴ساعته ۰۱۵/۱ تا ۰۲۵/۱است و چون يک نسبت است واحد هم ندارد.SG ادرار درطول شبانه روز متغير است ( به دليل متغير بودن نوع غذا و ميزان مصرف مايعات در طول روز ) ، لذا SG ادرار راندوم خيلي مفيد نيست و بررسي SG ادرار ۲۴ ساعته پيشنهاد مي شود.در هيدراتاسيون شديد و ديابت بيمزه SG کاهش و در ديابت قندي ، دهيدراتاسيون و اکلامپسي SG افزايش مي يابد.
PH: بين ۸-۶/۴ متغير بوده و معمولا حدود ۶ و کمي اسيدي است. براي پزشک اين مهم است که PH ادرار را با اطلاعات ديگر ارتباط دهد .مثلا در اسيدوز توبولار کليوي بر خلاف اسيدوز سيستميک PHادرار بيش از ۶ خواهد ماند چون توبولهاي کليه قادر به ترشح کافي يون H+ نيستند .
Protein : حضور مقادير زياد پروتئين در ادرار ميتواند يک علامت مهم بيماريهاي کليوي باشد.اما در شرايط فيزيولوژيک وبدون بيماري مثل ورزش و تب هم دفع پروتئين در ادرار افزايش مي يابد. دو مکانيسم اصلي که سبب پروتئينوري مي شوند :a) صدمه گلومرولي و b) اختلال در عمل بازجذب توبولها ميباشند.پروتئينوري شديد،متوسط و خفيف همگي در ارزيابي بيماري کليوي از اهميت ويژه اي برخوردارند (مثلا درگلومرولونفريت،شديد در پره اکلامپسي،متوسط و در پيلونفريت نوع خفيف قابل مشاهده است ).Glucose : گلوکوزوري بطور معمول وقتي ديده ميشود که ميزان گلوکز خون از حد آستانه کليوي بيشتر باشد (>180mg/dl) .هرچند گاهي بطور طبيعي آستانه کليوي برخي افراد پايين تر از اين هم ميباشد.ديابت شيرين، تزريق سرمهاي قندي ومصرف يکباره و زياد کربوهيدراتها ( گلوکوزوري گذرا) از دلايل گلوکوزوري هستند.
KetonAceton : اجسام کتوني درطي کاتابوليسم اسيدهاي چرب ايجاد ميشوند.کتونوري به دنبال کتوزيس(افزايش کتونها در خون) حادث ميشود.وقتي شخص دچار کمبود مصرف قندها وکربوهيدراتها (مثل روزه داري طولاني) يا دفع کربوهيدراتها از بدن وي افزايش مي يابد(مثلا در اسهال و استفراغهاي شديد) يا سلولها قادر به دريافت و مصرف کربوهيدرات نيستند(مثلا ديابت)، کتونها بدليل مصرف چربيها و سوخت ناقص آنها، در خون و ادرار افزايش مي يابند.Blood : هماچوري، وجود خون درادرار است. گلبولهاي قرمز مي توانند در شرايط فيزيولوژيک (مثل ورزش سنگين، تب و عادت ماهانه) و يا پاتولوژيک(مثل التهاب حاد مثانه، تروما، زخمها، عفونتها، سرطانهاي کليه يا مثانه، ضربه به کليه ، انفارکتوس و گلومرولونفريت) در ادرار ظاهر شوند.
Hemoglubin : هموگلوبينوري، حضور هموگلوبين درادرار بدون حضور RBC ميباشد.اگر به هر دليلي هموليز داخل عروقي در بيمار رخ دهد ( مثل آنمي هموليتيک دارويي، انگل مالاريا، ترانسفوزيون خونناسازگار، سوختگيهاي شديد، ورزشهاي شديد مثل قدم روهاي نظاميان روي سنگفرشها، مارگزيدگي و…) هموگلوبين ِخارج شده از RBCها از کليه ها عبور کرده، وارد ادرار مي شود.البته اگر درهماچوري، ادرار قليايي باشد يا SG آن پايين باشد(زير ۱٫۰۰۷) RBC ها ممکن است در ادرار ليز شده و هموگلوبين آنها در ادرار آزاد ميشود.
Bilirubin & Urobilinogen: بيلي روبين کونژوگه(مستقيم) به دليل محلول بودن در آب ميتواند از سد کليه ها عبور کرده وارد ادرار شود( نوع غيرکونژوگه در آب نامحلول است) لذادربيماريهايي که ميزان بيليروبين کونژوگه افزايش مي يابد (مثل انسداد مجاري صفراوي) بيلي روبين در ادرارافزايش مي يابد(دقت کنيد که درنوزادان با بيليروبين بالا، بيليروبينوري نداريم).در روده، بيليروبين به ترکيبي به نام اوروبيلينوژن تبديل ميشود که از طريق مدفوع دفع ميگردد. ۱۰تا ۱۵درصد اوروبيلينوژن ِمدفوع ، به خون بازجذب شده و از طريق ادرار دفع ميگردد.اگر به هر دليلي انسدادي در مسير بيلي روبين از کبد به صفرا يا از صفرا به روده رخ دهد (مثل سرطان يا سنگها) بيليروبين وارد مدفوع نشده،اوروبيلينوژني هم توليد نميشود؛ لذا اوروبيلينوژن ِ ادرار منفي ميشود.اما اگر ساخت بيليروبين افزايش يابد و به مدفوع راه يابد(مثل يرقان هموليتيک يا هپاتيت)اوروبيلينوژن ادرار نيز افزايش خواهد يافت.
Nitrit: اگر در ادرار، باکتري به ميزان متوسط و بيشتر حضور داشته باشد و آن باکتري از احياکنندگان نيترات به نيتريت باشد ،نيتريت ادرار مثبت خواهد شد.
WBC: گلبولهاي سفيد مي توانند از هر جايي (بين گلومرول تا ميزراه) به ادرار راه يابند . حداکثرميزان نرمال لوکوسيتها در ادرار ۲ عدد در هر فيلد ميکروسکوپي ميتواند باشد.افزايش لوکوسيتهاي ادرار وابسته به يک پروسه التهابي در مجاري ادرار(مثل عفونتها، نفريتها، آزردگيهاي مثانه، ميزناي و يا پيشابراه) و يا مجاورت آن(مثل آپانديسيت يا پانکراتيت) ميباشد.وجود سيلندرهاي (cast) گلبول سفيد ميتوانند شاهدي بر کليوي بودن منشأ WBCهاي ادرار باشند.در يک ادرار قليايي و هيپوتونيک ميزان WBCادرار درعرض يک ساعت، ۵۰درصد کاهش مي يابد(اهميت ارسال به موقع و انجام به موقع آزمايش U/A).تجمع لوکوسيتي(WBC clamp) قوياً مطرح کننده عفونتهاي حاد و يا التهاب مثانه يا ميزراه است.
RBC: گلبولهاي قرمز مي توانند از هر جايي (بين گلومرول تا ميزراه) به ادرار راه يابند.بطور نرمال گلبول قرمز در ادرار يافت نميشودهرچند وجود ۱تا۲ گلبول سرخ در هر فيلد ميکروسکوپي معمولا غيرطبيعي نيست.در سنگهاي ادراري ، عفونتهاي شديد، سرطانها و نيز عادت ماهيانه، RBCها در ادرار ظاهر ميشوند.
Epithelial cells***: انواع مختلف سلولهاي اپيتليال(سلولهاي توبولار کليوي، ترانزيشنال و اسکواموس)در ادرار قابل مشاهده اند.افتراق بين اين سلولها بسيار مشکل است اما مهمترين ِ آنها سلولهاي توبولار کليوي هستند که ازدياد آنها در ادرار مي تواند آسيب به کليه و لگنچه را مطرح سازد . کلاً حضور تعداد اندکي سلول اپي تليال (بخصوص پوششي و ترانزيشنال) درحد ۴-۳ عدد در هر فيلد ميکروسکوپي نرمال است و افزايش قابل توجه آنها ميتواند نشان از التهاب ناحيه اي از دستگاه ادراري باشد.
Mucus: رشته هاي موکوس که به شکل رشته هايي دراز و موجدارو يا توده اي در ادرار قابل مشاهده اند،به ميزان کم در ادرار طبيعي بوده ولي مقادير زياد آن در التهابات و دستکاريهاي دستگاه ادراري ديده ميشوند.
Bacteria: بطور طبيعي ادرار ِ کليه ها و مثانه عاري از باکتري بوده ولي امکان دارد آلودگي با باکتريهاي موجود در پيشابراه يا واژن يا ساير منابع خارجي اتفاق بيافتد. حضور مقدار بالاي باکتري در ادرار بخصوص در حضور تعداد قابل توجه WBCدر ادرار مؤيد حضور يک عفونت ادراري است.
Cast (سيلندرها): سيلندرها در مجاري لوله هاي کليوي شکل ميگيرند و بدليل اينکه در مجراها بشکل قالب لوله ها در مي آيند به اين نام (سيلندر= استوانه) خوانده ميشوند . مجاري کليوي، موکوپروتئيني به نام تام هورسفال ترشح ميکنند که ماده بنيادي سيلندرهاست.درصورت توقف ادرار (کاهش چشمگير در جريان ادرار) يا غلظت بالاي مواد حل شده و وجود محتويات پروتئيني در ادرار،کَستها ميتوانند در لوله هاي ديستال و مجاري جمع کننده ادرار شکل بگيرند.سيلندرها هميشه منشأ کليوي دارند و معرفهاي بسيار مهم بيماريهاي کليوي هستند و بر اساس ظاهر و محتويات سلولي که در درونشان قرار ميگيرند طبقه بندي ميشوند(مثلا Leukocyte cast و يا Granular cast وياCrystalin cast و … ). به سيلندري که هيچ محتويات سلولي يا غيرسلولي ندارد Hyalin(شفاف) گويند که ميتواند در ادرارهاي نرمال به ميزان بسيار کمي ديده شود.در انواع نفريتها وآسيبهاي کليوي و نيز در پره -اکلامپسي Castها در ادرار ظاهر ميشوند و معمولا پروتئين چنين ادرارهايي مثبت است.
Crystal: کريستالهاي ادرار معمولا در ادرار تازه ديده نمي شوند ولي پس از مدتي ماندن در آزمايشگاه قابل مشاهده ميشوند.بدين معناکه اگر ادرار با يک ترکيب خاص قابل کريستاليزاسيون اشباع شده باشد يا خواص حلاليتي آنها تغيير نمايد تشکيل ميشوند.در برخي موارد اين کريستالها در کليه يا مجاري ادراري شکل ميگيرند( منجر به تشکيل سنگها). معمولا اغلب کريستالهاي ادراري قابل اهميت نيستند ( مثل کلسيم اگزالات، انواع اورات و فسفات ،اسيد اوريک و… که الزاماً دليل بر يک بيماري خاص نبوده ولي مي توانند در برخي بيماريها افزايش يابند.اما کريستالهايي چون تيروزين ،لوسين ،سيستئين و سولفاناميدها مهم و شاخص مهمي در بيماريهاي کبدي، سيستينوز و ايجاد صدمات کليوي مي باشند.
 
FBS قند خون ناشتا
PKU اسيد فنيل پيروويک در ادرار
Urine بطور کلي آزمايشات مربوط به ادرار هستند که البته بنا به درخواست همراه يک مورد ديگر ممکنه آمده باشد مثلا Urine Homocystine
2hpp مقدار گلوکز دوساعت بعد از صبحانه
Urea اوره خون و يا ادرار
BUN Blood urea nitrogen نيتروژن اوره ( آنزيم کليوي )
U.A اوريک اسيد خون يا ادرار
T.G تري گليسريد
HDL ليپوپرتئين با دانسيته بالا
LDL ليپو پرتيئن با دانسيته پايين . کلسترول بد
NA اندازه گيري سديم خون يا ادرار
K اندازه گيري پتاسيم
Ca اندازه گيري کلسيم ( fe و li و بقيه عناصر هم به همين ترتيب هستند )
RBC گلبولهاي قرمز
WBC گلبولهاي سفيد خون
TIBC اندازگيري ظرفيت اتصال آهن
SGOT آنزيم کبدي – اسپارتات آمينوترانسفراز-سرم گلوتاميک اگزالواستيک ترانس آميناز
SGPT آنزيم کبدي – آلانين آمينوترنسفراز گلوتاميک-پيروويک ترانس آميناز
ALP آنزيم کبدي – الکالن فسفاتاز قليايي (ALP) الکالين
ACP اسيد فسفاتاز
تيروتوپين TSH , تيري يدو تيروئين T3 , تيروکسين T4 هورمون هاي تيروئيد
OB خون مخفي در مدفوع
Stool/E وجود انگل در مدفوع
SEMEN آزمايش اسپرم . اسپرموگرام
PCT تست بعد از مقاربت
FSH آزمايشات هورموني فوليکول استيموليتينگ
LH آزمايشات هورموني لوتئيزين
T تستوسترون
PTH پارا تيروئيد
Beta – HCG آزمايش خون بارداري
PSA آزمايشات پروستات
C.B.C آزمايشات روتين خون شامل هموگلوبين-Hb هماتوکريت-Hct شمارش گلبول قرمز و سفيد و پلاکت-شمارش اريتروسيت-شمارش ترومبوسيت-انديسهاي سلولي- ديفرانسياسيون
ارسال شده توسط : مریم غلام زاده
برچسب‌ها: روش بررسی همه تست های آزمایشگاهی بالینی
+ نوشته شده در  ساعت   توسط مینا | 
طرز تهیه انواع ژل ها و محلول های استخراج DNA و  PCR

طرز تهیه انواع محلول های استخراج DNA و PCR

SOLUTION RECIPES

 

 

DYES, STAINS, AND COLORANTS

 

6X Agarose Gel Loading Dye

                                                                                    200 mL

            Glycerol                                                          30 mL

            Bromophenol Blue                                          0.5 g

            Xylene Cyanol                                                0.5 g

 

Destain

                                                                                    1 L

            Methanol                                                         50 mL

            Acetic Acid                                                     42 mL             

 

1 mg/mL Ethidium Bromide

                                                                                    50 mL

            Ethidium Bromide                                          50 mg

            Wrap bottle in aluminum foil.

 

5X Ficoll/Loading Dye (Orange Dye)

                                                                                    25 mL

Ficoll                                                               6.75 g             

Orange G                                                        0.25 g             

Heat to dissolve (use 50 mL conical in water bath).  Aliquot and store at -20°C.

 

Formamide Loading Buffer

                                                                                    10 mL

Formamide                                                      9.5 mL

Bromophenol Blue                                          0.009 mg

Xylene Cyanol FF                                           0.009 mg

Store at 4°C

 

HTA Loading Buffer                       

                                                                                    10 mL

            Tris                                                                  0.03g

            Glycerol                                                          5 mL

            1 M DTT                                                         5 μL

            Bromophenol Blue                                          pinch

            Xylene Cyanol                                                pinch

           

 

 

 

 

SDS Lysis Buffer

                                                                                    50 mL

            SDS                                                                 0.5 g

            Glycerol                                                          5 mL

            β-Mercapto Ethanol                                        5 mL

            1M Tris, pH 6.8                                               2 mL

            Bromophenol Blue                                          pinch

            Xylene Cyanol

 

Stain              

                                                                                    1 L

            Methanol                                                         150 mL

            Acetic Acid                                                     100 mL

            Coomassie Blue                                              2 g

 

Urea Loading Buffer

                                                                                    10 mL

            Urea                                                                4.8 g

            EDTA                                                             0.074 g

            1 M Tris pH 7.5                                               50 μL

            Xylene Cyanol                                                0.025 g

            Bromophenol Blue                                          0.025 g

 

BUFFERS

 

10X Annealing Buffer

                                                                                    10 mL

            1 M Tris-HCl pH 7.5                                       1 mL

            2 M KCl                                                          1.25 mL

 

Blot Transfer Buffer

                                                                                    1 L

            Methanol                                                         200 mL

            Glycine                                                            14.4 g

            Tris                                                                  3.03 g

                       

Breaking Buffer

                                                                                    10 mL

10% Triton X-100                                           2 mL                           

10% SDS                                                        1 mL   

5M NaCl                                                         200 ml             

1M Tris-Cl, pH8.0                                           100 ml             

0.5M EDTA                                                    20 ml                           

Sigma water                                                    6.68 mL          

           

 

Carbonate Buffer

                                                                                    1 L

            Sodium Carbonate                                          8.4 g

            Magnesium Chloride                                       0.203 g

            pH to 9.8

 

Cell Competency Buffer

                                                                                    500mL

100% Glycerol                                                70 mL

Calcium Chloride                                            50 mL

 

Denaturing Buffer

                                                                                    10 mL

            Deionized Formamide                                    5 mL

            Formalin                                                          2 mL

            10X MOPS                                                     1 mL

            DEPC H2O                                                     2 mL

 

Hirt Lysis Buffer

                                                                                    100 mL

            10% SDS                                                        6 mL

            1 M Tris-HCl, pH 7.4                                      1 mL

            1 M EDTA, pH 8.0                                         1 mL

 

Hybridization Buffer

                                                                                    500 mL

            10% SDS                                                        5 mL

            Liquid Blocking Agent                                   25 mL

            5X SSC                                                           470 mL

            Make 10 mL aliquots and store in –20 freezer

 

4X Lower Tris

                                                                                    1 L

            Tris                                                                  181.71 g

            PH to 8.8

 

10X MOPS Buffer

                                                                                    1 L

            MOPS                                                             83.72 g

            Sodium Acetate                                              13.61 g

            0.5M EDTA                                                    20 mL

            pH to 7.0

            Autoclave

 

NETS Buffer

                                                                                    500 mL           

            1M NaCl                                                         50 mL

            100mM Tris HCl, pH 7.6                                50 mL

            0.5M EDTA                                                    1 mL

            10 % SDS                                                       25 mL

 

10X Non-Denaturing Gel Shift Buffer

                                                                                    1 L

Tris                                                                  30.28 g

Glycine                                                            144.1 g

EDTA                                                             3.72 g

Filter sterilize

 

10X PBS

                                                                                    500 mL

            NaCl                                                                40 g

            KCl                                                                 1 g

            Na2PO4                                                            7.2 g

            KH2PO4                                                          1.2 g

            pH to 7.5

           

1X PBS – FA

                                                                                    1 L

            NaCl                                                                8.5 g

            NaH2PO4 – H2O                                             0.14 g

            Na2HPO4                                                                   1.28 g

            pH to 7.5

 

10X PCR Buffer

                                                                                    100 mL

            KCl                                                                 3.728 g

            1M Tris-HCl, pH 9.0                                       10 mL

            MgCl2                                                                                  0.143 g

            Triton-X 100                                                   1 mL

 

Polynucleotide Kinase Storage Buffer

                                                                                    50 mL

            1M Tris-HCl                                                    2.5 mL

            10 mM EDTA                                                 500 ml

            1 M DTT                                                         50 ml

            Glycerol                                                          25 mL

 

 

Renaturation Buffer

                                                                                    100 mL                                   

1M Tris HCl, pH 7.5                                       1 mL

NaCl                                                                0.146 g

1M MgCl2                                                                         200 μL

 

5X RT Buffer

                                                                                    10 mL

            Tris-HCl, pH 7.8                                             500 μL

            2M KCl                                                           1.25 mL

            1M MgCl2                                                                         500 μL

 

Sample Buffer

                                                                                    100mL

            1M Tris-HCl pH 6.8                                        25 mL

            2% SDS                                                          2 g

            Glycerol                                                          10 mL

            1M DTT                                                          2 mL

            Bromophenol Blue                                          0.01 g

 

SDS Running 5X Gel Buffer

                                                                                    5 L                   2 L

Tris                                                                  150 g               60 g

SDS                                                                 25 g                 10 g

Glycine (electrophoresis grade)                      720 g               288 g

20X SSC

                                                                                    1 L                   2 L

Sodium Chloride                                             175.32 g          350.64 g

Sodium Citrate                                                88.23 g            176.46 g

pH to 7.0                                                                                                                    

 

5X SSC, .1% SDS:

                                                                                    1 L

            20X SSC                                                         250 mL

10% SDS                                                        10 mL

 

1X SSC, 1% SDS

*The 1X SSC in the stock jug is a straight dilution, NOT this recipe!*

                                                                                    1 L

            20X SSC                                                         50 mL

            10% SDS                                                        10 mL

 

1X STE

                                                                                    1 L

            NaCl                                                                5.84 g

            1M Tris-HCl, pH 7.5                                       20 mL

            0.5M EDTA                                                    20 mL

 

STE + STET

                                                                                    1 L

            1M Tris-Cl, pH 8.0                                          10 mL

            NaCl                                                                5.84 g

            0.5M EDTA                                                    2 mL

            Triton X-100                                                   500 μl

 

50X TAE

                                                                                    1 L

Tris                                                                  242 g

Glacial Acetic Acid                                        57.1 mL

0.5M EDTA                                                    100 mL

 

10X TBE

                                                                                    1 L                   2 L      

Tris                                                                  108.8 g            217.6 g                       

Boric Acid                                                      55.0 g              110.0 g

0.5M EDTA                                                    40 mL              80 mL

 

5X TBS

                                                                                    1 L                   2 L

Tris                                                                  24.2 g              48.4 g

NaCl                                                                292.4 g            584.8 g

            pH to 7.5

 

10X TE Buffer

                                                                                    1 L

1M Tris-Cl, pH 7.5                                          100 mL

0.5M EDTA pH 8.0                                        20 mL

Filter sterilize.

 

TENG 1% Triton

                                                                                    1 L

            Gelatin            solution (25 g/500 mL)                      50 mL

            NaCl                                                                8.77 g

            0.5M EDTA                                                    10 mL

            1M Tris, pH 7.3                                               10 mL

            Triton X-100                                                   10 mL

TENG 0.1% Triton 

                                                                                    1 L

            Gelatin                                                                        50 mL

            NaCl                                                                8.77 g

            0.5M EDTA                                                    10 mL

            1M Tris, pH 7.3                                               10 mL

            Triton X-100                                                   1 mL

 

TENS

                                                                                    1 L      

            1M Tris, pH 7.4                                               10 mL

            NaCl                                                                5.84 g

            0.5M EDTA                                                    10 mL

            SDS                                                                 5 g

            β-mercapto Ethanol                                         10 mL

            Filter sterilize

 

1X TNE + SDS

                                                                                    100 mL

            SDS                                                                 0.40 g

            1M Tris, pH 8.0                                               1 mL

            2 mL of NaCl (5 M)                                        5.84 g

            0.5M EDTA                                                    200 ml

 

5X Transcription Buffer

                                                                                    10 mL

            1M Tris, pH 7.5                                               2 mL

            0.2M MgCl2                                                                     1.5 mL

            100mM Spermidone                                       1 mL

            NaCl                                                                0.29 g

 

10X Transfer Buffer

                                                                                    1 L

            Tris                                                                  24.7 g             

            Glycine                                                            112.6 g           

Do not pH the transfer buffer

 

 

1X Transfer Buffer

                                                                                    1 L

            10X Transfer Buffer                                       100 mL

            Methanol                                                         200 mL

Add methanol to final 1X dilution only

 

 

 

Tris-Saline

                                                                                    1 L

            1M Tris, pH 7.3                                               5 mL

            NaCl                                                                8.77 g

 

Tris-Saline 0.1% Triton

                                                                                    2 L

            1M Tris, pH 7.2                                               5 mL

            1M Tris, pH 7.4                                               5 mL

            5M NaCl                                                         60 mL

            Triton X-100                                                   2 mL

 

1X TTBS

                                                                                    1 L

            TBS                                                                 667 mL

            Tween-20                                                        333 mL

 

4X Upper Tris

                                                                                    1 L

            1M Tris, pH 6.8                                               500 mL

            SDS                                                                 4 g

 

QIAGEN AND NUCLEIC ACID DETECTION BUFFERS

 

Buffer 1

                                                                                    100 mL

            NaCl                                                                0.877 g

            Tris                                                                  1.21 g

            pH to 7.5

 

Buffer 2

                                                                                    100 mL

            NaCl                                                                2.34 g

            Tris                                                                  1.21 g

            pH to 7.5

 

Buffer A

                                                                                    100 mL

            Tris                                                                  1.576 g

            NaCl                                                                1.754 g

            pH to 9.5

            Autoclave

 

 

 

Buffer A, 0.3% Tween 20

                                                                                    100 mL

            Tris                                                                  1.576 g

            NaCl                                                                1.754 g

            Tween 20                                                        0.3 mL

            pH to 9.5

            Autoclave

 

Qiagen Buffer P1

                                                                                    107 mL

            1M Tris, pH 8.0                                               5 mL   

            0.5M EDTA, pH 8.0                                       2 mL

            H2O                                                                 100 mL

            Autoclave

Rnase A (add after autoclaving)                     0.0107 g
Store at 4° C

 

Qiagen Buffer P2

                                                                                    100 mL

            NaOH                                                             0.8 g

            SDS                                                                 1.0 g

 

Qiagen Buffer P3

                                                                                    100 mL

            Potassium Acetate                                          25.03 g

            pH to 4.8 (use 12N)

            Autoclave

 

Qiagen Buffer QBT

                                                                                    100 mL

            NaCl                                                                4.38 g

            Ethanol                                                            15 mL

            MOPS                                                             1.05 g

            Triton X-100                                                   150 ml

            pH to 7.0 (use 1N)

 

Qiagen Buffer QC

                                                                                    100 mL

            NaCl                                                                5.84 g

            MOPS                                                             1.05 g

            Ethanol                                                            15 mL

            pH to 7.0, filter sterilize.

 

Qiagen Buffer QF

                                                                                    100 mL

NaCl                                                                7.31 g

MOPS                                                             1.03 g

Ethanol                                                            15 mL

PH to 8.2

 

Solution 1 (Plasmid prep)

                                                                                    500 mL

            1M glucose                                                      25 mL

            1M Tris, pH 8.0                                               12.5 mL

            0.5M EDTA, pH 8.0                                       10 mL

 

Solution 2 (Plasmid prep)

                                                                                    200 mL

            NaOH                                                             1.6 g

            SDS                                                                 2.0 g

           

Solution 3 (Plasmid Prep)

                                                                                    100 mL

            Potassium Acetate                                          29.4 g

            Acetic Acid, Galacial                                      11.5 mL

 

 

MEDIA AND MEDIA SOLUTIONS

 

C – Leu Media (Leucine dropout media)

                                                                                    1 L

            CSM-Leu-Ura                                                 0.67 g

            Uracil                                                              0.024 g

            Heat gently to dissolve.  Filter sterilize, store in cold room.

 

Complete Medium + Interleukin-2 (IL-2)

                                                                                    1 L

            RPMI – 1640                                                  890 mL

            FBS                                                                 100 mL

            Penicillin/Streptomycin                                   10 mL

Interleuken-2 (in 1 mL Sigma H20)                200 μL

PHA                                                                1 vial

 

1M Glucose

                                                                                    100 mL

            Glucose                                                           18 g

            Filter sterilize

 

HAT medium (w/ puromycin)

                                                                                    500 mL                       

            100X mycophenolic acid (4 mg/mL)              5 mL

            100X xanthine (25 mg/mL)                            5 mL

            100X hypoxanthine (1.35 mg/mL)                 5 mL

FBS                                                                 50 mL

            HEPES                                                            5 mL

            Antibiotics                                                      5 mL

            Puromycin                                                       250 mg

            DMEM                                                            425 mL

 

LB Media

                                                                                    1 L

            NaCl                                                                10 g

            Yeast extract                                                   5 g

            Tryptone Peptone                                            10 g

            Make 250 mL aliquots.  Autoclave.

 

L-Glutamine

                                                                                    505 mL

            L-Glutamine (5.84 g/200 mL)                         5 mL

            Media                                                              500 mL

 

RPMI (10% FBS)

                                                                                    550 mL

            Na(CO3)2 (7.5%)                                             12.5 mL

            10X RPMI                                                      55 mL

            FBS                                                                 55 mL

            1N NaOH                                                       4 mL

            Pen/Strep                                                         5 mL

 

SOC medium

                                                                                    250 mL

Tryptone Peptone                                            5 g

Yeast extract                                                   1.25 g

NaCl                                                                0.15 g

KCl                                                                 0.05 g

MgCl2                                                                                  0.51 g

MgSO4                                                                                2.5 mL

20% glucose (add after autoclaving)              10 mL

 

 

 

 

 

 

YPD Media

                                                                                    1 L

            Yeast extract                                                   10 g

            Peptone                                                           20 g

            Dextrose                                                          20 g

            (dextrorotatory form of glucose)

            Filter sterilize

 

 

POLYACRYLAMIDE AND AGAROSE GEL SOLUTIONS

 

30% Acrylamide/Bis-Acrylamide (37.5:1)

                                                                                    500 mL

            Acrylamide                                                     150 g

            Bis-acrylamide                                                4 g

 

1% TAE Agarose Gel

                                                                                    100 mL

            1X TAE                                                          100 mL

            Agarose or AquaPor LE                                 1 g

            Microwave to melt.  Allow to cool slightly, pour, and let solidify.

 

PAGE, Denaturing

                                                            1 L

                                                                        6%             8%           10%              12%

40% Acrylamide (19:1)                       150 mL      200          250               300

10X TBE                                             100 mL      100          100               100

Urea                                                    410 g          410          410              410

 

PAGE, Non-Denaturing

                                                                                    5.0%, 150 mL             8.0%, 150 mL

            30% Acrylamide                                             25 mL                          40 mL 

            10X TBE                                                         15 mL                          15 mL             

            Ammonium Persulfate                                    0.1 g                            0.1 g               

 

10% SDS-PAGE, Denaturing, for Proteins

                                                                                    Lower Layer               3% Stack

            40% Acrylamide/Bis (29:1)                            2.5 mL                         500 ml

            4X Lower Buffer                                            2.5 mL                         1.25 mL

            dH2O                                                               4.9 mL                         3.2 mL

            Polymerize with:

            Temed                                                             10 ml                            20 ml

            10% APS                                                        50 ml                            20 ml

            Makes 2 mini gels.                                             

 

 

OTHER SOLUTIONS AND REAGENTS

 

10% (w/v) Ammonium Persulfate (APS)

                                                                                    500 mL

            Ammonium persulfate                                    50 g

            Make 50 mL aliquots.  Store at -20°C.

 

Cesium Chloride Solution

                                                                                    100 mL

            CsCl                                                                96 g

            50 mM Sodium Acetate, pH 5.0                     50 mL

            DEPC                                                              100 ml

            Stir at 37°C overnight and autoclave.

 

CsCl – EtBr Solution

                                                                                    18 mL

CsCl                                                                1.0 g

DNA solution                                                 10 mL

10 mg/mL EtBr                                               8 mL

 

Chloroform/ Isoamyl Alcohol Solution

                                                                                    100 mL

            Chloroform                                                     96 mL

            Isoamyl Alcohol                                              4 mL

 

Denaturing Solution

                                                                                    1 L

            NaCl                                                                87.66 g

            NaOH                                                             20.0 g

 

0.1% DEPC-Treated H2O

                                                                                    1 L

dH2O                                                                   1000 mL

Diethyl Pyrocarbonate (DEPC)                          1 mL

Shake well for several minutes.

Stir overnight with cap loosened at 37°C and autoclave.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

10 mM dNTP Dilution

*Use 100mM dNTP Set from Invitrogen*

                                                                                    2.5 mL

            GTP                                                                 250 ml

            ATP                                                                 250 ml

            TTP                                                                 250 ml

            CTP                                                                 250 ml

            dH2O                                                               1.5 mL

            Combine dNTPs.  Divide into two tubes of 500 ml each.  Add 750 ml Sigma water to each tube.  Make 50 ml aliquots and store at -20°C.

 

500 mM EDTA, pH 8.0

                                                                                    500 mL

            EDTA Disodium Salt Dihydrate                    93.05 g

            Heat to dissolve.  pH to 8.0

            **EDTA does not dissolve until nearly pH 8.0

 

Gelatin

                                                                                    500 mL

            Gelatin                                                                        25 g

            Heat to dissolve.  Autoclave.

 

1% Gelatin/TBS

                                                                                    100 mL

            TBS                                                                 100 mL

            Gelatin                                                                        1.0 g

            Microwave 1 minute on high

 

1% Gelatin/TTBS

                                                                                    100 mL

            TTBS                                                               100 mL

            Gelatin                                                                        1.0 g

            Microwave 1 minute on high

 

Guanidine Thiocyanate Solution

                                                                                    1 L

            Guanidine Thiocyanate                                   508 g

            Sarkosyl                                                          5 g

            25 mM Sodium Citrate                                   7.35 g

            2-MercaptoEthanol                                         7 mL

            Filter sterilize.  Cover bottle with aluminum foil.

 

IPTG, 200 μg/mL

                                                                                    10 mL

IPTG                                                               0.002 g

Sigma H2O                                                      10 mL

 

10X Lithium Acetate

                                                                                    250 mL

Lithium Acetate                                              25.5 g

            pH to 7.5.  Filter sterilize.

 

Lysozyme, 50 mg/mL

                                                                                    10 mL

            Lysozyme                                                        0.5 g

            Store at -20°C.

 

Neutralizing Solution

                                                                                    1 L

            NaCl                                                                87.66 g

            Tris                                                                  121.0 g

            pH to 7.5

 

Phenol/ Chloroform/ Isoamyl Alcohol Solution

                                                                                    100 mL

            Phenol (heat until liquid)                                50 mL             

            Chloroform                                                     48 mL

            Isoamyl alcohol                                               2 mL

 

Pronase

                                                                                    100 mL

            Pronase                                                            2.0 g   

1M Tris, pH 7.5                                               1 mL

NaCl                                                                0.058 g

            Self-digest for 1 hour at 37°C and store at -20°C.

 

RTA 6/0 (0.3M salt)

                                                                                    1 L

            0.5M Na2HPO4                                               12.0 mL

            0.5M NaH2PO4                                               88.0 mL

            5M NaCl                                                         60.0 mL

            Glycerol                                                          100.0 mL

 

RTA 6/0 (1M salt, 25mM Imidazole)

                                                                                    1 L

            0.5M Na2HPO4                                               12.0 mL

            0.5M NaH2PO4                                               88.0 mL

            5M NaCl                                                         200.0 mL

            Glycerol                                                          100.0 mL

            Imidazole                                                        1.70 g

            Wrap bottle in foil.

 

RTA 6/0 (1M salt, 500mM Imidazole)

                                                                                    1 L

            0.5M Na2HPO4                                               12.0 mL

            0.5M NaH2PO4                                               88.0 mL

            5M NaCl                                                         100.0 mL

            Glycerol                                                          100.0 mL

            Imidazole                                                        34.03 g

            Wrap bottle in foil.

RTA  7/8

                                                                                    1 L

0.5M Na2HPO4                                               89.6 mL

0.5M NaH2PO4                                               10.4 mL

5M NaCl                                                         60.0 mL

Glycerol                                                          100 mL

 

RTA 7/8 (no salt or glycerol)

                                                                                    1 L

            0.5M Na2HPO4                                               89.6 mL

            0.5M NaH2PO4                                               10.4 mL          

 

RTD

                                                                                    1 L

            1M Tris, pH 7.0                                               50 mL

            Glycerol                                                          100 mL

            5M NaCl                                                         5 mL

            0.5M EDTA                                                    2 mL                           

 

RT Mix

                                                                                    20 mL

            1M Tris, pH 7.8                                               1 mL

            2M KCl                                                           750 μL

            100 mM MgCl2                                                               1 mL

            NP-40                                                              100 μL

            Poly (rA) ∙ p(dT) (1U/mL)                              1 mL

            1M DTT                                                          40 μL

            Sigma H20                                                       to volume

            Make 1 mL aliquots.  Store at -20° C.

 

10% (w/v) SDS         

                                                                                    500 mL

SDS                                                                 50 g

 

 

 

Sucrose Gradient

                                                                                    100 mL

            5M NaCl                                                         2 mL

            1M Tris , pH 8.0                                              1 mL

            0.5M EDTA, pH 8.0                                       200 ml

            Sucrose                                                            w/v, varies according to need

 

X-Gal (20 mg/mL)

                                                                                    5 mL

            X-Gal                                                              0.100 g

            Dimethyl Foramide                                         5 mL

                        (use glass pipette!)

            Make ~500 μL aliquots.  Store in brown glass vials at -20° C

موفق باشید
برچسب‌ها: طرز تهیه انواع محلول های استخراج DNA و PCR
+ نوشته شده در  ساعت   توسط مینا | 

 طرز تهیه انواع  ژل ها و محلول های  استخراج DNA و PCR

 

طرز تهیه انواع محلول های  استخراج DNA و PCR

SOLUTION RECIPES

 

 

DYES, STAINS, AND COLORANTS

 

6X Agarose Gel Loading Dye

                                                                                    200 mL

            Glycerol                                                          30 mL

            Bromophenol Blue                                          0.5 g

            Xylene Cyanol                                                0.5 g

 

Destain

                                                                                    1 L

            Methanol                                                         50 mL

            Acetic Acid                                                     42 mL             

 

1 mg/mL Ethidium Bromide

                                                                                    50 mL

            Ethidium Bromide                                          50 mg

            Wrap bottle in aluminum foil.

 

5X Ficoll/Loading Dye (Orange Dye)

                                                                                    25 mL

Ficoll                                                               6.75 g             

Orange G                                                        0.25 g             

Heat to dissolve (use 50 mL conical in water bath).  Aliquot and store at -20°C.

 

Formamide Loading Buffer

                                                                                    10 mL

Formamide                                                      9.5 mL

Bromophenol Blue                                          0.009 mg

Xylene Cyanol FF                                           0.009 mg

Store at 4°C

 

HTA Loading Buffer                       

                                                                                    10 mL

            Tris                                                                  0.03g

            Glycerol                                                          5 mL

            1 M DTT                                                         5 μL

            Bromophenol Blue                                          pinch

            Xylene Cyanol                                                pinch

           

 

 

 

 

SDS Lysis Buffer

                                                                                    50 mL

            SDS                                                                 0.5 g

            Glycerol                                                          5 mL

            β-Mercapto Ethanol                                        5 mL

            1M Tris, pH 6.8                                               2 mL

            Bromophenol Blue                                          pinch

            Xylene Cyanol

 

Stain              

                                                                                    1 L

            Methanol                                                         150 mL

            Acetic Acid                                                     100 mL

            Coomassie Blue                                              2 g

 

Urea Loading Buffer

                                                                                    10 mL

            Urea                                                                4.8 g

            EDTA                                                             0.074 g

            1 M Tris pH 7.5                                               50 μL

            Xylene Cyanol                                                0.025 g

            Bromophenol Blue                                          0.025 g

 

BUFFERS

 

10X Annealing Buffer

                                                                                    10 mL

            1 M Tris-HCl pH 7.5                                       1 mL

            2 M KCl                                                          1.25 mL

 

Blot Transfer Buffer

                                                                                    1 L

            Methanol                                                         200 mL

            Glycine                                                            14.4 g

            Tris                                                                  3.03 g

                       

Breaking Buffer

                                                                                    10 mL

10% Triton X-100                                           2 mL                           

10% SDS                                                        1 mL   

5M NaCl                                                         200 ml             

1M Tris-Cl, pH8.0                                           100 ml             

0.5M EDTA                                                    20 ml                           

Sigma water                                                    6.68 mL          

           

 

Carbonate Buffer

                                                                                    1 L

            Sodium Carbonate                                          8.4 g

            Magnesium Chloride                                       0.203 g

            pH to 9.8

 

Cell Competency Buffer

                                                                                    500mL

100% Glycerol                                                70 mL

Calcium Chloride                                            50 mL

 

Denaturing Buffer

                                                                                    10 mL

            Deionized Formamide                                    5 mL

            Formalin                                                          2 mL

            10X MOPS                                                     1 mL

            DEPC H2O                                                     2 mL

 

Hirt Lysis Buffer

                                                                                    100 mL

            10% SDS                                                        6 mL

            1 M Tris-HCl, pH 7.4                                      1 mL

            1 M EDTA, pH 8.0                                         1 mL

 

Hybridization Buffer

                                                                                    500 mL

            10% SDS                                                        5 mL

            Liquid Blocking Agent                                   25 mL

            5X SSC                                                           470 mL

            Make 10 mL aliquots and store in –20 freezer

 

4X Lower Tris

                                                                                    1 L

            Tris                                                                  181.71 g

            PH to 8.8

 

10X MOPS Buffer

                                                                                    1 L

            MOPS                                                             83.72 g

            Sodium Acetate                                              13.61 g

            0.5M EDTA                                                    20 mL

            pH to 7.0

            Autoclave

 

NETS Buffer

                                                                                    500 mL           

            1M NaCl                                                         50 mL

            100mM Tris HCl, pH 7.6                                50 mL

            0.5M EDTA                                                    1 mL

            10 % SDS                                                       25 mL

 

10X Non-Denaturing Gel Shift Buffer

                                                                                    1 L

Tris                                                                  30.28 g

Glycine                                                            144.1 g

EDTA                                                             3.72 g

Filter sterilize

 

10X PBS

                                                                                    500 mL

            NaCl                                                                40 g

            KCl                                                                 1 g

            Na2PO4                                                            7.2 g

            KH2PO4                                                          1.2 g

            pH to 7.5

           

1X PBS – FA

                                                                                    1 L

            NaCl                                                                8.5 g

            NaH2PO4 – H2O                                             0.14 g

            Na2HPO4                                                                   1.28 g

            pH to 7.5

 

10X PCR Buffer

                                                                                    100 mL

            KCl                                                                 3.728 g

            1M Tris-HCl, pH 9.0                                       10 mL

            MgCl2                                                                                  0.143 g

            Triton-X 100                                                   1 mL

 

Polynucleotide Kinase Storage Buffer

                                                                                    50 mL

            1M Tris-HCl                                                    2.5 mL

            10 mM EDTA                                                 500 ml

            1 M DTT                                                         50 ml

            Glycerol                                                          25 mL

 

 

Renaturation Buffer

                                                                                    100 mL                                   

1M Tris HCl, pH 7.5                                       1 mL

NaCl                                                                0.146 g

1M MgCl2                                                                         200 μL

 

5X RT Buffer

                                                                                    10 mL

            Tris-HCl, pH 7.8                                             500 μL

            2M KCl                                                           1.25 mL

            1M MgCl2                                                                         500 μL

 

Sample Buffer

                                                                                    100mL

            1M Tris-HCl pH 6.8                                        25 mL

            2% SDS                                                          2 g

            Glycerol                                                          10 mL

            1M DTT                                                          2 mL

            Bromophenol Blue                                          0.01 g

 

SDS Running 5X Gel Buffer

                                                                                    5 L                   2 L

Tris                                                                  150 g               60 g

SDS                                                                 25 g                 10 g

Glycine (electrophoresis grade)                      720 g               288 g

20X SSC

                                                                                    1 L                   2 L

Sodium Chloride                                             175.32 g          350.64 g

Sodium Citrate                                                88.23 g            176.46 g

pH to 7.0                                                                                                                    

 

5X SSC, .1% SDS:

                                                                                    1 L

            20X SSC                                                         250 mL

10% SDS                                                        10 mL

 

1X SSC, 1% SDS

*The 1X SSC in the stock jug is a straight dilution, NOT this recipe!*

                                                                                    1 L

            20X SSC                                                         50 mL

            10% SDS                                                        10 mL

 

1X STE

                                                                                    1 L

            NaCl                                                                5.84 g

            1M Tris-HCl, pH 7.5                                       20 mL

            0.5M EDTA                                                    20 mL

 

STE + STET

                                                                                    1 L

            1M Tris-Cl, pH 8.0                                          10 mL

            NaCl                                                                5.84 g

            0.5M EDTA                                                    2 mL

            Triton X-100                                                   500 μl

 

50X TAE

                                                                                    1 L

Tris                                                                  242 g

Glacial Acetic Acid                                        57.1 mL

0.5M EDTA                                                    100 mL

 

10X TBE

                                                                                    1 L                   2 L      

Tris                                                                  108.8 g            217.6 g                       

Boric Acid                                                      55.0 g              110.0 g

0.5M EDTA                                                    40 mL              80 mL

 

5X TBS

                                                                                    1 L                   2 L

Tris                                                                  24.2 g              48.4 g

NaCl                                                                292.4 g            584.8 g

            pH to 7.5

 

10X TE Buffer

                                                                                    1 L

1M Tris-Cl, pH 7.5                                          100 mL

0.5M EDTA pH 8.0                                        20 mL

Filter sterilize.

 

TENG 1% Triton

                                                                                    1 L

            Gelatin            solution (25 g/500 mL)                      50 mL

            NaCl                                                                8.77 g

            0.5M EDTA                                                    10 mL

            1M Tris, pH 7.3                                               10 mL

            Triton X-100                                                   10 mL

TENG 0.1% Triton 

                                                                                    1 L

            Gelatin                                                                        50 mL

            NaCl                                                                8.77 g

            0.5M EDTA                                                    10 mL

            1M Tris, pH 7.3                                               10 mL

            Triton X-100                                                   1 mL

 

TENS

                                                                                    1 L      

            1M Tris, pH 7.4                                               10 mL

            NaCl                                                                5.84 g

            0.5M EDTA                                                    10 mL

            SDS                                                                 5 g

            β-mercapto Ethanol                                         10 mL

            Filter sterilize

 

1X TNE + SDS

                                                                                    100 mL

            SDS                                                                 0.40 g

            1M Tris, pH 8.0                                               1 mL

            2 mL of NaCl (5 M)                                        5.84 g

            0.5M EDTA                                                    200 ml

 

5X Transcription Buffer

                                                                                    10 mL

            1M Tris, pH 7.5                                               2 mL

            0.2M MgCl2                                                                     1.5 mL

            100mM Spermidone                                       1 mL

            NaCl                                                                0.29 g

 

10X Transfer Buffer

                                                                                    1 L

            Tris                                                                  24.7 g             

            Glycine                                                            112.6 g           

Do not pH the transfer buffer

 

 

1X Transfer Buffer

                                                                                    1 L

            10X Transfer Buffer                                       100 mL

            Methanol                                                         200 mL

Add methanol to final 1X dilution only

 

 

 

Tris-Saline

                                                                                    1 L

            1M Tris, pH 7.3                                               5 mL

            NaCl                                                                8.77 g

 

Tris-Saline 0.1% Triton

                                                                                    2 L

            1M Tris, pH 7.2                                               5 mL

            1M Tris, pH 7.4                                               5 mL

            5M NaCl                                                         60 mL

            Triton X-100                                                   2 mL

 

1X TTBS

                                                                                    1 L

            TBS                                                                 667 mL

            Tween-20                                                        333 mL

 

4X Upper Tris

                                                                                    1 L

            1M Tris, pH 6.8                                               500 mL

            SDS                                                                 4 g

 

QIAGEN AND NUCLEIC ACID DETECTION BUFFERS

 

Buffer 1

                                                                                    100 mL

            NaCl                                                                0.877 g

            Tris                                                                  1.21 g

            pH to 7.5

 

Buffer 2

                                                                                    100 mL

            NaCl                                                                2.34 g

            Tris                                                                  1.21 g

            pH to 7.5

 

Buffer A

                                                                                    100 mL

            Tris                                                                  1.576 g

            NaCl                                                                1.754 g

            pH to 9.5

            Autoclave

 

 

 

Buffer A, 0.3% Tween 20

                                                                                    100 mL

            Tris                                                                  1.576 g

            NaCl                                                                1.754 g

            Tween 20                                                        0.3 mL

            pH to 9.5

            Autoclave

 

Qiagen Buffer P1

                                                                                    107 mL

            1M Tris, pH 8.0                                               5 mL   

            0.5M EDTA, pH 8.0                                       2 mL

            H2O                                                                 100 mL

            Autoclave

Rnase A (add after autoclaving)                     0.0107 g
Store at 4° C

 

Qiagen Buffer P2

                                                                                    100 mL

            NaOH                                                             0.8 g

            SDS                                                                 1.0 g

 

Qiagen Buffer P3

                                                                                    100 mL

            Potassium Acetate                                          25.03 g

            pH to 4.8 (use 12N)

            Autoclave

 

Qiagen Buffer QBT

                                                                                    100 mL

            NaCl                                                                4.38 g

            Ethanol                                                            15 mL

            MOPS                                                             1.05 g

            Triton X-100                                                   150 ml

            pH to 7.0 (use 1N)

 

Qiagen Buffer QC

                                                                                    100 mL

            NaCl                                                                5.84 g

            MOPS                                                             1.05 g

            Ethanol                                                            15 mL

            pH to 7.0, filter sterilize.

 

Qiagen Buffer QF

                                                                                    100 mL

NaCl                                                                7.31 g

MOPS                                                             1.03 g

Ethanol                                                            15 mL

PH to 8.2

 

Solution 1 (Plasmid prep)

                                                                                    500 mL

            1M glucose                                                      25 mL

            1M Tris, pH 8.0                                               12.5 mL

            0.5M EDTA, pH 8.0                                       10 mL

 

Solution 2 (Plasmid prep)

                                                                                    200 mL

            NaOH                                                             1.6 g

            SDS                                                                 2.0 g

           

Solution 3 (Plasmid Prep)

                                                                                    100 mL

            Potassium Acetate                                          29.4 g

            Acetic Acid, Galacial                                      11.5 mL

 

 

MEDIA AND MEDIA SOLUTIONS

 

C – Leu Media (Leucine dropout media)

                                                                                    1 L

            CSM-Leu-Ura                                                 0.67 g

            Uracil                                                              0.024 g

            Heat gently to dissolve.  Filter sterilize, store in cold room.

 

Complete Medium + Interleukin-2 (IL-2)

                                                                                    1 L

            RPMI – 1640                                                  890 mL

            FBS                                                                 100 mL

            Penicillin/Streptomycin                                   10 mL

Interleuken-2 (in 1 mL Sigma H20)                200 μL

PHA                                                                1 vial

 

1M Glucose

                                                                                    100 mL

            Glucose                                                           18 g

            Filter sterilize

 

HAT medium (w/ puromycin)

                                                                                    500 mL                       

            100X mycophenolic acid (4 mg/mL)              5 mL

            100X xanthine (25 mg/mL)                            5 mL

            100X hypoxanthine (1.35 mg/mL)                 5 mL

FBS                                                                 50 mL

            HEPES                                                            5 mL

            Antibiotics                                                      5 mL

            Puromycin                                                       250 mg

            DMEM                                                            425 mL

 

LB Media

                                                                                    1 L

            NaCl                                                                10 g

            Yeast extract                                                   5 g

            Tryptone Peptone                                            10 g

            Make 250 mL aliquots.  Autoclave.

 

L-Glutamine

                                                                                    505 mL

            L-Glutamine (5.84 g/200 mL)                         5 mL

            Media                                                              500 mL

 

RPMI (10% FBS)

                                                                                    550 mL

            Na(CO3)2 (7.5%)                                             12.5 mL

            10X RPMI                                                      55 mL

            FBS                                                                 55 mL

            1N NaOH                                                       4 mL

            Pen/Strep                                                         5 mL

 

SOC medium

                                                                                    250 mL

Tryptone Peptone                                            5 g

Yeast extract                                                   1.25 g

NaCl                                                                0.15 g

KCl                                                                 0.05 g

MgCl2                                                                                  0.51 g

MgSO4                                                                                2.5 mL

20% glucose (add after autoclaving)              10 mL

 

 

 

 

 

 

YPD Media

                                                                                    1 L

            Yeast extract                                                   10 g

            Peptone                                                           20 g

            Dextrose                                                          20 g

            (dextrorotatory form of glucose)

            Filter sterilize

 

 

POLYACRYLAMIDE AND AGAROSE GEL SOLUTIONS

 

30% Acrylamide/Bis-Acrylamide (37.5:1)

                                                                                    500 mL

            Acrylamide                                                     150 g

            Bis-acrylamide                                                4 g

 

1% TAE Agarose Gel

                                                                                    100 mL

            1X TAE                                                          100 mL

            Agarose or AquaPor LE                                 1 g

            Microwave to melt.  Allow to cool slightly, pour, and let solidify.

 

PAGE, Denaturing

                                                            1 L

                                                                        6%             8%           10%              12%

40% Acrylamide (19:1)                       150 mL      200          250               300

10X TBE                                             100 mL      100          100               100

Urea                                                    410 g          410          410              410

 

PAGE, Non-Denaturing

                                                                                    5.0%, 150 mL             8.0%, 150 mL

            30% Acrylamide                                             25 mL                          40 mL 

            10X TBE                                                         15 mL                          15 mL             

            Ammonium Persulfate                                    0.1 g                            0.1 g               

 

10% SDS-PAGE, Denaturing, for Proteins

                                                                                    Lower Layer               3% Stack

            40% Acrylamide/Bis (29:1)                            2.5 mL                         500 ml

            4X Lower Buffer                                            2.5 mL                         1.25 mL

            dH2O                                                               4.9 mL                         3.2 mL

            Polymerize with:

            Temed                                                             10 ml                            20 ml

            10% APS                                                        50 ml                            20 ml

            Makes 2 mini gels.                                             

 

 

OTHER SOLUTIONS AND REAGENTS

 

10% (w/v) Ammonium Persulfate (APS)

                                                                                    500 mL

            Ammonium persulfate                                    50 g

            Make 50 mL aliquots.  Store at -20°C.

 

Cesium Chloride Solution

                                                                                    100 mL

            CsCl                                                                96 g

            50 mM Sodium Acetate, pH 5.0                     50 mL

            DEPC                                                              100 ml

            Stir at 37°C overnight and autoclave.

 

CsCl – EtBr Solution

                                                                                    18 mL

CsCl                                                                1.0 g

DNA solution                                                 10 mL

10 mg/mL EtBr                                               8 mL

 

Chloroform/ Isoamyl Alcohol Solution

                                                                                    100 mL

            Chloroform                                                     96 mL

            Isoamyl Alcohol                                              4 mL

 

Denaturing Solution

                                                                                    1 L

            NaCl                                                                87.66 g

            NaOH                                                             20.0 g

 

0.1% DEPC-Treated H2O

                                                                                    1 L

dH2O                                                                   1000 mL

Diethyl Pyrocarbonate (DEPC)                          1 mL

Shake well for several minutes.

Stir overnight with cap loosened at 37°C and autoclave.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

10 mM dNTP Dilution

*Use 100mM dNTP Set from Invitrogen*

                                                                                    2.5 mL

            GTP                                                                 250 ml

            ATP                                                                 250 ml

            TTP                                                                 250 ml

            CTP                                                                 250 ml

            dH2O                                                               1.5 mL

            Combine dNTPs.  Divide into two tubes of 500 ml each.  Add 750 ml Sigma water to each tube.  Make 50 ml aliquots and store at -20°C.

 

500 mM EDTA, pH 8.0

                                                                                    500 mL

            EDTA Disodium Salt Dihydrate                    93.05 g

            Heat to dissolve.  pH to 8.0

            **EDTA does not dissolve until nearly pH 8.0

 

Gelatin

                                                                                    500 mL

            Gelatin                                                                        25 g

            Heat to dissolve.  Autoclave.

 

1% Gelatin/TBS

                                                                                    100 mL

            TBS                                                                 100 mL

            Gelatin                                                                        1.0 g

            Microwave 1 minute on high

 

1% Gelatin/TTBS

                                                                                    100 mL

            TTBS                                                               100 mL

            Gelatin                                                                        1.0 g

            Microwave 1 minute on high

 

Guanidine Thiocyanate Solution

                                                                                    1 L

            Guanidine Thiocyanate                                   508 g

            Sarkosyl                                                          5 g

            25 mM Sodium Citrate                                   7.35 g

            2-MercaptoEthanol                                         7 mL

            Filter sterilize.  Cover bottle with aluminum foil.

 

IPTG, 200 μg/mL

                                                                                    10 mL

IPTG                                                               0.002 g

Sigma H2O                                                      10 mL

 

10X Lithium Acetate

                                                                                    250 mL

Lithium Acetate                                              25.5 g

            pH to 7.5.  Filter sterilize.

 

Lysozyme, 50 mg/mL

                                                                                    10 mL

            Lysozyme                                                        0.5 g

            Store at -20°C.

 

Neutralizing Solution

                                                                                    1 L

            NaCl                                                                87.66 g

            Tris                                                                  121.0 g

            pH to 7.5

 

Phenol/ Chloroform/ Isoamyl Alcohol Solution

                                                                                    100 mL

            Phenol (heat until liquid)                                50 mL             

            Chloroform                                                     48 mL

            Isoamyl alcohol                                               2 mL

 

Pronase

                                                                                    100 mL

            Pronase                                                            2.0 g   

1M Tris, pH 7.5                                               1 mL

NaCl                                                                0.058 g

            Self-digest for 1 hour at 37°C and store at -20°C.

 

RTA 6/0 (0.3M salt)

                                                                                    1 L

            0.5M Na2HPO4                                               12.0 mL

            0.5M NaH2PO4                                               88.0 mL

            5M NaCl                                                         60.0 mL

            Glycerol                                                          100.0 mL

 

RTA 6/0 (1M salt, 25mM Imidazole)

                                                                                    1 L

            0.5M Na2HPO4                                               12.0 mL

            0.5M NaH2PO4                                               88.0 mL

            5M NaCl                                                         200.0 mL

            Glycerol                                                          100.0 mL

            Imidazole                                                        1.70 g

            Wrap bottle in foil.

 

RTA 6/0 (1M salt, 500mM Imidazole)

                                                                                    1 L

            0.5M Na2HPO4                                               12.0 mL

            0.5M NaH2PO4                                               88.0 mL

            5M NaCl                                                         100.0 mL

            Glycerol                                                          100.0 mL

            Imidazole                                                        34.03 g

            Wrap bottle in foil.

RTA  7/8

                                                                                    1 L

0.5M Na2HPO4                                               89.6 mL

0.5M NaH2PO4                                               10.4 mL

5M NaCl                                                         60.0 mL

Glycerol                                                          100 mL

 

RTA 7/8 (no salt or glycerol)

                                                                                    1 L

            0.5M Na2HPO4                                               89.6 mL

            0.5M NaH2PO4                                               10.4 mL          

 

RTD

                                                                                    1 L

            1M Tris, pH 7.0                                               50 mL

            Glycerol                                                          100 mL

            5M NaCl                                                         5 mL

            0.5M EDTA                                                    2 mL                           

 

RT Mix

                                                                                    20 mL

            1M Tris, pH 7.8                                               1 mL

            2M KCl                                                           750 μL

            100 mM MgCl2                                                               1 mL

            NP-40                                                              100 μL

            Poly (rA) ∙ p(dT) (1U/mL)                              1 mL

            1M DTT                                                          40 μL

            Sigma H20                                                       to volume

            Make 1 mL aliquots.  Store at -20° C.

 

10% (w/v) SDS         

                                                                                    500 mL

SDS                                                                 50 g

 

 

 

Sucrose Gradient

                                                                                    100 mL

            5M NaCl                                                         2 mL

            1M Tris , pH 8.0                                              1 mL

            0.5M EDTA, pH 8.0                                       200 ml

            Sucrose                                                            w/v, varies according to need

 

X-Gal (20 mg/mL)

                                                                                    5 mL

            X-Gal                                                              0.100 g

            Dimethyl Foramide                                         5 mL

                        (use glass pipette!)

            Make ~500 μL aliquots.  Store in brown glass vials at -20° C


برچسب‌ها: طرز تهیه انواع محلول های استخراج DNA و PCR
+ نوشته شده در  ساعت   توسط مینا | 

بهترین و کارامدترین روش استخراج دی ان باکتریایی حهت آزمایش پی سی آر

استخراج با کیفیت   باکتری DNA

اختصاصی میکروبیولوژی مسجد سلیمان

مراحل استخراج DNA

پس از کشت و وخالص سازی باکتری و انتقال چند لوپ آن به فسفات بافر روش زیر که بهترین و کارامدترین روش استخراج دی ان ای می باشد را انجام می دهیم

برای استخراج DNA ما از روش زیر استفاده نمودیم

1/ابتدا میکروتیوبها را در دور 10000 دور به مدت 3 دقیقه سانتریفیوژ می کنیم سپس محلول رویی را دور ریختیم

2.به رسوب باکتری 100 میکرولیتر محلول STES افزودیم و به میزان 20 میکرولیتر محلول TE (با pH =7.6) به آ افزودیم به میکروتیوب خود چند ضربه زدیم تا رسوب در محلول حل شود

3.پس از آن 3 میکرولیتر لیزوزیم به وسیله سمپلر پیپتینگ کرده و به مدت یک ساعت در دمای 37 درجه انکوبه کردیم

4.سپس 30 میکرولیتر پروتئیناز K  به میکروتیوب افزودیم و 30 دقیقه در دمای 56 درجه سانیگراد بن ماری قرار دادیم.

5.سپس نصف حجم فنل و نصف هم کلروفرم اضافه نمودیم و به مدت 5 دقیقه در 13000rpm   سانتریفیوژ کردیم.

6.پس از سانتریفیوژ فاز رویی را جدا کرده و به ویال دیگری انتقال دادیم و 0.1 حجم جدا شده استات سدیم و 2.5 برابر حجم جدا شده الکل اتانول مطلق افزودیم. ویال ها را چند بار به آرامی سر و ته میکنیم و بعد ویال ها را به مدت 30 دقیقه در فریزر 20- می گذاریم.

7.پس از آن  ویال ها را از فریزر درآورده و به مدت 5 دقیقه درrpm 13000  سانتریفیوژ کردیم سپس محلول رویی را دور ریخته و 500 میکرولیتر الکل 70 درصد به ویال ها اضافه کردیم.سپس چند ضربه به ویال ها زدیم مجددا به مدت 5 دقیقه در 13000 دور سانتریفیوژ کردیم سپس محلول رویی را دور ریختیم و ویال ها را می گذاریم تا کاملا خشک شود.

8.در آخر به ویال ها به میزان 100 میکرولیتر محلول TE  با pH=8 ریختیم

سپس کیفیت DNA  مستخرج توسط دستگاه نانو دراپ قرائت گردید

 

بهترین و کارامدترین روش استخراج دی ان باکتریایی حهت آزمایش پی سی آر

اختصاصی میکروبیولوژی مسجد سلیمان


برچسب‌ها: مراحل استخراج DNA باکتریایی, بهترین روش
+ نوشته شده در  ساعت   توسط مینا | 
همه چیز در مورد انجام آنتی بیوگرام و لوله نیم مک فارلند

روش تهیه محلول استاندارد 5/0 مک فارلند

محیط نیم مک فارلند محیطی در تست آنتی بیوگرام است که میزان کدر بودن نمونه خود را با ان مقایسه می کنیم . این محیط حاوی۱۰۸ × ۱.۵   باکتری است . نحوه تهیه این محیط در آزمایشگاه به شرح زیر است : برای تهیه کدورت0.5 مک فارلند ما 0.5 میلی لیتر کلرید باریم 0.48 مولار را در 99.5 میلی لیتر اسید سولفوریک0.36 نرمال مخلوط کردیم. که این محیط به مدت به مدت 6 ماه اگر در تاریکی و  در ظرف دربسته قابل نگهداری است.اگر در هر زمان رسوبی در لوله مشاهده شود محیط غیر قابل استفاده خواهد بود.

آماده سازی سوسپانسیون میکروبی 5/0 مک فارلند

به کمک سواپ ازبالای  3 - 4 کلنی از بالای  کلنی ها برداشته و در داخل یک لوله سرم فیزولوژی بصورت سوسپانسیون در آوردیم تا کدورتی به اندازه کدورت لوله مک فارلند به ما بدهد

بعد از ایزوله کردن باکتری ، مقداری از کلونی باکتری را به وسیله انس (نه لوپ) برداشته و در سرم فیزیولوژی استریل حل می کنیم . باید در نظر داشت که چون ، در تست آنتی بیوگرام میزان کدر بودن برای ما خیلی مهم است ، بنابراین در انتخاب مقدار نمونه باید دقت کنیم تا نمونه را بیشتر یا کمتر از نیم مک فارلند برنداریم . اگر میزان کدورت کمتر از نیم مکفارلند باشد ، مقداری دیگر از نمونه را در سرم فیزیولوژی استریل حل می کنیم و یا اگر میزان کدر بودن ، بیشتر از نیم مک فارلند باشد در این صورت باید مقداری سرم فیزیولوژی استریل اضافه کرد تا به کدورت مناسب و برابر با نیم مک فارلند برسیم.در آن هنگام برای کشت استفاده کردیم .اگر سوسپانسیون رقیق باشد قطر عدم رشد بزرگتر و اگر غلیظ تر از استاندارد باشد  بدون اینکه حساسیت ارگانیزم  تغییری کرده باشد هاله عدم رشد کمتری خواهیم گرفت

انجام آزمایش تعیین حساسیت به آنتی بیوتیک:

بعد از فرو بردن سواپ استریل در سوسپانسیون میکروبی اضافه محلول را با فشار دادن س.اپ به کناره لوله, گرفته و سپس در سطح پلیت سه بار در حالت زاویه 60 درجه کشت چمنی دادیم سپس سواپ را دور قسمت داخلی پلیت چرخانده و سپس وارد محلول ضد عفونی کردیم سپس با استفاده از پنس دیسک هایی را که از یک ساعت قبل از فریزر بیرون آورده بودیم را در سطح محیط کشت قرار دادیم سپس با نوک پنس  هر کدام از دیسک ها را در جای خود محکم کردیم پس از قرار دادن دیسک های آنتی بیوتیکی برای همه  پلیت ها و انجام این عمل  آنها را به مدت 24 ساعت در 37  درجه قرار دادیم سپس با استفاده از خط کش دقیق قطر هاله عدم رشد را بر حسب میلیمتر اندازه گرفته  و با استفاده از جدول,میزان حساسیت باکتری را نسبت به آنتی بیوتیک به صورت حساس,نیمه حساس,و مقاوم گزارش نمودیم

موفق و پیروز و سربلند باشید....... جوانان درس بخوانید


برچسب‌ها: همه چیز در مورد انجام آنتی بیوگرام و لوله نیم مک ف
+ نوشته شده در  ساعت   توسط مینا | 

 همه چیز درباره بیماری جدید کرونا ویروس coronavirus یا MERS-CoV :

با کشف موارد جدید بیماری کرونا ویروس  coronavirus نگرانی سازمان بهداشت جهانی در این خصوص افزایش یافته است .

تا کنون حدود ۴۱ نفر به این بیماری جدید مبتلا شده اند که عمده موارد بیماری در کشور عربستان سعودی می باشد . در امارات متحده عربی ، بحرین و قطر نیز موارد بیماری گزارش شده است . متاسفانه مرگ ۱۸ نفر از این افراد در اثر همین بیماری تایید شده است . موارد بیماری در کشورهای اروپایی فرانسه و انگلستان کشف و تایید شده است .

تاریخچه : اولین مورد بیماری در سپتامبر ۲۰۱۲ در مردی ۶۰ ساله در عربستان سعودی کشف شد که به مرگ بیمار انجامید . این مرد چند روز قبل از آن به دبی سفر کرده بود و دومین مورد در مردی ۴۹ ساله در قطر که او نیز در گذشت . و کشف بیماری اولین بار در آزمایشگاه Health Protection Agency's  در Colindale لندن به تایید رسید .

پیشنهاد شده است که این بیاری به نام سندرم نارسایی تنفسی خاورمیانه یا Middle East respiratory syndrome coronavirus  که با  اختصار MERS-CoV نامگذاری شود .

از نکات قابل توجه این بیماری این است که اکثر موارد گزارش آن در میان مراکز بهداشتی درمانی نظیر بیمارستانها رخ داده است که در فرانسه موارد ابتلا فقط در بیمارستان گزارش شده است که به نظر می رسد که عامل زمینه ای مانند بیماریهای دیگری باید وجود داشته باشد تا احتمال ابتلا انسان به این بیماری افزایش یابد .

عده ای از پزشکان این بیماری را از نوع بیماری سارس می دانند که حدود سالهای ۲۰۰۳ در خاور دور شایع بود . بیماری سارس نیز دارای علایم تنفسی است که می تواند منجر به مرگ انسان شود . ویروس سارس نیز از خانواده coronavirus ها می باشد .

تاریخچه coronavirus ها : این خانواده ویروسی اولین بار در سال ۱۹۶۰ کشف شده است که موجب بروز بیماریهایی از خانواده سرما خوردگی در انسان و حیوانات می گردد و از ویژگی آنها زوائد تاج مانند بر روی سطوح دیواره ویروسها می باشد .

علائم اصلی بیماری MERS-CoV : اگر چه به گفته WHO علایم این بیماری هنوز ناشناخته می باشد ولی از علایم اصلی این بیماری تب ، سرفه ، تنگی نفس و مشکلات حاد تنفسی می باشد. بیمار ممکن است سرفه های چند روزه ظاهرا بدون دلیل نیز داشته باشد . در موارد حاد مشکلات گوارشی نظیر اسهال ،  نارسایی حاد تنفسی ، اختلالات انعقادی ، پریکاردیت و نارسایی کلیه نیز گزارش شده است که مورد اخیر در صورت بروز بیمار را به همودیالیز نیازمند می سازد .

دوره کمون این بیماری حدود ۷ روز می باشد .

درمان MERS-CoV : هنوز هیچ درمان تایید شده ای برای این بیماری شناخته نشده است و تنها توصیه به حمایت تنفسی در بیمارستان در بیماران دارای مشکلات حاد تنفسی می تواند چاره ساز باشد و در واقع مراکز پزشکی موارد حاد بیماری را صرفا درمان علامتی می نمایند .

نحوه انتقال بیماری  MERS-CoV : اطلاعات ما در این باره هنوز کامل نیست ولی روشهای انتقال بیماری از انسان به انسان شبیه بیماری آنفلوآنزا می باشد . از طریق سرفه و عطسه . اما احتمال انتقال بیماری در فضای باز بسیار محدود بوده و موارد انتقال انسان به انسان در مواردی اتفاق افتاده است که افراد به مدت طولانی در فضای بسته در کنار فرد بیمار بوده اند مانند افرادی که در بیمارستانها با بیماراندر ارتباط بوده اند .

هنوز مشخص نیست که این بیماری اولین بار از طریق حیوانات به انسان منتقل شده است یا از طریق سطوح آلوده به ویروس .

نحوه حفاظت از ویروس MERS-CoV و پاکسازی ویروس : با توجه به این که کل اطلاعات در مورد این بیماری حداکثر به ۳ ماه گذشته بر می گردد ، هنوز نمی توان با قاطعیت در این خصوص اظهار نظر کرد ولی لازم است افراد بیمار ایزوله شوند و کارکنان بهداشتی که در تماس با بیماران قرار دارند همه ی موارد حفاظتی نظیر استفاده از لباس مخصوص ، دستکش و حتی عینکهای ایمنی را مد نظر قرار دهند .

این ویروس بسیار شکننده بوده و در خارج از بدن انسان و حیوانات بعد از ۲۴ ساعت از بین می رود . همچنین مواد شوینده و ضد عفونی کننده ساده می توانند به راحتی coronavirus را نابود نمایند .

مهمترین مواردی که افراد می توانند رعایت کنند بهداشت فردی و شستشوی مرتب دست ها می باشد همچنین بهتر است در برخورد با افراد مشکوک از ماسکهای ویژه استفاده شود که معمولا در همه ی کشورها در دسترس می باشد .

بهتر است افراد از سفرهای غیر ضرور به کشور هایی  عربستان سعودی ، قطر و امارات متحدی عربی خودداری نمایند .

منشا ویروس : هنوز نمی دانیم این ویروس از کجا آمده است . حیوانات ؟ پرندگان ؟ یا ...  محققان احتمال می دهند این ویروس در اثر جهش در بدن حیوانات یا پرندگان ایجاد شده باشد( zoonoses ) . اما هنوز نمی توان در این خصوص اظهار نظر نمود . شایعاتی نیز در خصوص دستساز بودن این بیماری توسط بشر وجود دارد .

واکسن : ندارد !

روش تشخیص و تست آزمایشگاهی : برای تشخیص این بیماری از روشی موسوم به PCR استفاده می شود که قطعات DNA ویروس را مورد بررسی قرار می دهد . این روش در جمهوری اسلامی ایران توسط آزمایشگاههای وزارت بهداشت نیز انجام می شود .

احتیاط : همانگونه که قبلا ذکر شد بهتر است افراد در سفرهای خارجی خود این بیماری را در کشورهای هدف مد نظر داشته باشند . این مورد به خصوص در مورد ایرانیان که زیاد به عربستان سعودی و دبی سفر می کنند باید مورد توجه مردم و دولت قرار گیرد . همچنین لازم است افراد در برخورد با بیمارانی که علایم شبیه سرما خوردگی و آنفلاآنزا دارند و از اخیرا به کشورهای عربی و فرانسه مسافرت داشته اند احتیاط نمایند و موارد حفاظتی را مد نظر داشته باشند .


برچسب‌ها: همه چیز در مورد بیماری کروناو ویروس کرونا
+ نوشته شده در  ساعت   توسط مینا | 
همه چیز در مورد پروستاگلاندین

  •  

    Prostaglandin

  • The prostaglandins are a group of hormone-like lipid compounds that are derived enzymatically from fatty acids and have important functions in the animal body. Every prostaglandin contains 20 carbon atoms, including a 5-carbon ring.

     

     

    Related topics

    NSAIDs inhibit cyclooxygenase and reduce prostaglandin synthesis.
    Explore: Non-steroidal anti-inflammatory drug, Cyclooxygenase

    The prostaglandins, together with the thromboxanes and prostacyclins, form the prostanoid class of fatty acid derivatives, a subclass of eicosanoids.

    Explore: Thromboxane, Prostacyclin

     

    PGE2 is also the prostaglandin that ultimately induces fever.

    Explore: Prostaglandin E2

     
     

    پروستاگلاندین‌ها یکی از مهمترین واسطه‌های شیمیایی در داخل بدن هستند که با تاثیر بر روی گیرنده‌های مختلف سلولی تاثیرات متنوع زیادی در بدن دارند. پروستاگلاندینها مولکول لیپیدی بیست کربنه بوده ساختاری شبیه کلسترول دارند. پروستاگلاندینها دارای انواع مختلفی مانند F2,E2 آلفا ، PGI2 و غیره هستند.[۱]

    نحوه ساخت

    آنزیم فسفولیپاز فسفولیپیدهای غشای سلول را به اسید آراشیدونیک تبدیل می کند. سپس اسید آراشیدونیک در درون کوکس یا همان آنزیم سیکلواکسیژناز (هردو نوع ۱ و ۲) باعث تبدیل به پروستاگلاندینها می‌شود.[۲]

    تاثیرات

    پروستاگلاندین‌ها یکی از مهمترین واسطه‌های التهاب می باشند و مهار ساخت آنها توسط داروهای ضد التهاب غیر استروئیدی(مانند بروفن*[۱]) موجب کاهش التهاب می شود. این واسطه‌ها همچنین در انقباض رحمی در هنگام زایمان، افزایش حرکات روده، بهبود دفاع مخاطی معده و افزایش جریان خون کلیوی نیز نقش دارند که این نقشها مبنای ساخت داروهای متعددی قرار گرفته است.

    Infiammatorio.jpg

    انواع

    جدول زیر مقایسه انواع پروستاگلاندین را نشان می‌دهد[۳][۴][۵]

    نوعگیرندهعملکرد
    PGI2IP
    PGE2EP1
    • تنگ کننده برونش
    • انقباض در ماهیچه دستگاه گوارش
    EP2
    • گشاد کننده برونش
    • سست کننده ماهیچه در دستگاه‌گوارش
    • گشادکننده عروق
    EP3
    • کاهش ترشح اسید در معده
    • افزایش ترشح مخاط (موکوس) در معده
    • انقباض رحمی(دوران حاملگی)
    • منقبض کننده ماهیچه در دستگاه‌گوارش
    • محدودکننده لیپولیز
    غیراختصاصی
    PGFFP

    پانویس

    ^  پاراستامول بیشتر یک داروی ضد درد محسوب می‌شود تا ضد التهاب. در هنگام التهاب داروهایی چون بروفن بهتر پاسخ‌های ضد التهابی دارند.[۶]

    جستارهای وابسته

    ایکوزانوئید

    منابع

    1.  داروشناسی کاربردی، دکتر منصور رحمانی، انتشارات جعفری 1387
    2.  "phospholipase" در فرهنگ پزشکی دورلندز
    3.  Rang, H. P. (2003). Pharmacology (5th ed.). Edinburgh: Churchill Livingstone. pp. 234. ISBN 0-443-07145-4
    4.  Fabre JE, Nguyen M, Athirakul K, Coggins K, McNeish JD, Austin S, Parise LK, FitzGerald GA, Coffman TM, Koller BH. Journal of Clinical investigation, 2001, 107:603
    5.  Gross S,Tilly P, Hentsch D, Vonesch JL, Fabre JE. Journal of Experimental Medicine, 2007, 204:311
    6.  Medicina e riabilitazione

    برچسب‌ها: همه چیز در مورد پروستاگلاندین
    + نوشته شده در  ساعت   توسط مینا | 
     
    صفحه نخست
    پست الکترونیک
    آرشیو وبلاگ
    عناوین مطالب وبلاگ
    درباره وبلاگ
    زیست شناسی سلولی و ملکولی میکروبیولوژی مسجدسلیمان

    پیوندهای روزانه
    همه چیز درباره افزایش بازیابی نفت با باکتری ها و میکروبها MEOR microbial enhanced oil recovery
    همه چیز در مورد ژنوم انسان سندرم ترنر و سندرم کلاین فیلتر
    کشت ادرار و خون در آزمایشگاه باکتریولوژی
    مطالب مفیدی درباره كارشناسي ارشد ناپيوسته ميكروبیولوژی پزشكي
    همه چیز در مورد بیماری های مقاربتی
    آزمایش اعتیاد کروماتوگرافی لایه نازک TLC
    آشنایی با جنس مایکوپلاسما genus mycoplasma
    مطالب متنوعی از دنیای زیبای میکروبیولوژی
    مطالب مفیدی در باره آنفولانزا Influenza
    همه چیز در مورد تب مالت و تست wright
    همه چیز درباره کومبس مستقیم و کومبس غیر مستقیم (Test Coombs)
    استاد زحمتکش
    همه چیز در مورد آزمایشات هماتولوژی بالینی
    همه چیز در مورد پروتئین a1c آزمایش Hb A1c
    آشنایی با چند تکنیک آزمایشگاهی
    همه چیز درمورد آنالايزرهاي بيوشيمي
    باكتريهاي سودوموناس Pesudomonas Bacteria
    كلستريديوم ها و مایکوباکتریوم ها و لاکتوباسیلوس ها
    محاسبه مقدار ESR
    تعیین زمان انعقادخون و تعیین زمان سیلان خون
    انیمیشن باکتری
    همه چیز در مورد تست CAMP
    همه چیز در مورد تست الایزا ELISA
    لیست تست های آزمایشگاهی
    روشهاي جداسازي و تشخيص باكتريهاي بيماريزا در مواد غذايي
    تمام تست های تشخیصی جنس استافیلوکوکوس
    آشنایی بامحیط کشت اوره آگار
    معرفی انواع محیط کشت 2
    آشنایی با محیط TSI تريپل شوگر آيرون
    تفسير اجزاي آزمايش خون
    کارنامه رتبه 1 و 3 میکروبیولوژی وزارت بهداشت و زمان ثبت نام آزمون وزارت بهداشت
    آشنایی کامل بر آنزیم های کبدیSGOT,SGPT علایم کلینیکی و ازمایشگاهی عفونت با HIV علایم کمبود اهن
    هموگلوبین گلوکوزیله HB A1C و بروسلا تجزیه ادرار
    همه چیز درباره PCR
    كارنامه ها و درصدهای پذیرفته شدگان كارشناسي ارشد
    آنفلوآنزای خوکی
    همه چیز در مورد رنگ آمیزی گرم
    جسم بار و رنگ آمیزی باکتریها
    آشنایی با کشت میکروارگانیزمها و میکروسکوپ ها
    همه چیز درباره شیگلا
    معرفی خانواده انتروباکتریاسه
    آزمایشهای تشخیص دیابت شیرین
    آنتی بیوگرام
    همه چیز درباره آنتی بیو تیک ها
    بیماری هاری
    همه چیز در مورد بیماری طاعون
    کلستریدیوم ها
    همه چیز درباره زخم معده
    آپاندیس
    همه چیز درباره مخمرها
    آرشیو پیوندهای روزانه





    Powered by WebGozar

    نوشته های پیشین
    مرداد 1393
    تیر 1393
    خرداد 1393
    اردیبهشت 1393
    اسفند 1392
    دی 1392
    آذر 1392
    آبان 1392
    مهر 1392
    شهریور 1392
    تیر 1392
    اردیبهشت 1392
    فروردین 1392
    اسفند 1391
    بهمن 1391
    دی 1391
    آذر 1391
    آبان 1391
    شهریور 1391
    مرداد 1391
    خرداد 1391
    اردیبهشت 1391
    فروردین 1391
    اسفند 1390
    بهمن 1390
    آذر 1390
    مهر 1390
    شهریور 1390
    تیر 1390
    فروردین 1390
    اسفند 1389
    آذر 1389
    مهر 1389
    شهریور 1389
    مرداد 1389
    تیر 1389
    آرشيو
    برچسب‌ها
    همه چیز در مورد قارچ ها (2)
    طرز تهیه انواع محلول های استخراج DNA و PCR (2)
    روش بررسی همه تست های آزمایشگاهی بالینی (1)
    اجزاء PCR (1)
    همه چیز درباره آيين‌نامه دوره كارشناسي‌ارشد ناپیوس (1)
    همه چیز در مورد پیوند مغز استخوان (1)
    میکروب (1)
    ab (1)
    بهترین روش (1)
    طبقه بندی ویروس ها (1)
    IG (1)
    مایکوتوکسین ها ی معروف (1)
    همه چیز در مورد کورینه باکتریوم دیفتریه (1)
    همه چیز در مورد آنتی بادی ها (1)
    ایمنوگلوبولین ها (1)
    سديم دودسيل سولفات (1)
    SDS و الکتروفورز (1)
    باسیلوس تورنجینسیس Bacillus thuringiensis (1)
    همه چیز در مورد مواد ژنتیکی و بیماریهای شایع ژنتیک (1)
    همه چیز درباره کم کاری و پرکاری تیروئید (1)
    همه چیز در مورد هپاتیت B (1)
    پنوموني باكتريايي چيست ویروس چیست (1)
    همه چیز درمورد رنگ آمیزی کپسول (1)
    همه چیز درمورد سندرم آشرمن (1)
    مطالبی درباره ریزوبیوم ها Rhizobium (1)
    همه چیز در مورد بیماری طاعون Plague (1)
    همه چیز درباره RT (1)
    PCR معرفی روش Real Time PCR (1)
    اتصال ویروسها و وارد کردن ژنومهای آنها در سلول هدف (1)
    همه چیز درمورد فصل گرما و عفونت ها و مسموميت هاي غ (1)
    همه چیز در مورد کورینه باکتریومها (1)
    مطالبی در مورد آرکیا (1)
    مطالبی در مورد آرکیا همه چیز در مورد (1)
    همه چیز در مورد PCR (1)
    همه چیز در مورد سیستم ایمنی و روش الیزا (1)
    قارچ ها را بهتر و کاملتر بشناسید (1)
    مطالب متنوعی از دنیای پهناور و بسیار زیبای میکروبی (1)
    مطالب مفیدی در باره آنفولانزا Influenza (1)
    تهیه ذخیره ی گلیسرول از کشت باکتری Glycerol stock (1)
    Magnetotactic bacteria بیوتروریسم bioterorism (1)
    همه چیز درمورد فلور میکروبی بدن انسان (1)
    همه چیز در مورد tottal protein توتال پروتئین (1)
    همه چیز در مورد تری گلیسرید و چربی خون (1)
    همه چیز در مورد LDL وHDL (1)
    همه چیز در مورد هورمون رشد (1)
    ۵ نکته برای ترشح بیشتر هورمون رشد (1)
    همه چیز در مورد سرماخوردگی میکروب های درگیر و درما (1)
    همه چیز درباره آمیبیازیس انتاموبا هیستولیتیکا (1)
    تو کسین های استافیلوکوکی (1)
    علائم و نشانه‌هااستافیلوکوک ارئوس مقاوم به متی سیل (1)
    همه چیز درمورد آلکالین فسفاتاز ها (1)
    آزمایش قند دراز مدت (1)
    a1c (1)
    همه چیز در مورد پروتئین a1c آزمایش Hb A1c (1)
    همه چیز درمورد هلیکوباکتر پیلوری و زخم معده (1)
    همه چیز در مورد روش پی آر ک PRK لیزیک و لایزیک (1)
    همه چیز در مورد سونوگرافی (1)
    همه چیز در مورد دیواره سلولی و سنتز پپتیدوگلیکان (1)
    میکروب MIS (1)
    همه چیز در مورد کلسترول خون Cholesterol (1)
    همه چیز در مورد جوش صورت علت و درمان قطعی کامل آن (1)
    همه چیز در مورد تعیین جنسیت جنین پسر میخواهید یا (1)
    برنامه ریزی برای ارشد رشته زیست شناسی سلولی ملکولی (1)
    همه چیز در مورد فیبروبلاست و بافیکوت (1)
    همه چیز در مورد انتقال دیابت نوع 2 به فرزندان (1)
    همه چیز در مورد اوریون Mumps (1)
    همه چیز در مورد سرخجه Rubella (1)
    مشخصات بیولوژیکی خاک (1)
    همه چیز در مورد سیتو مگالو ویروس Cytomegalovirus (1)
    همه چیز در مورد الکتروفورز (1)
    همه چیز در مورد استخراجRNA و کاربردهای آن (1)
    معرفی دستگاه نانو دراپ وچند مقاله جالب من باب بیول (1)
    همه چیز در مورد پروستاگلاندین (1)
    همه چیز در مورد بیماری کروناو ویروس کرونا (1)
    همه چیز در مورد انجام آنتی بیوگرام و لوله نیم مک ف (1)
    مراحل استخراج DNA باکتریایی (1)
    پیوندها
    زیست شناسی گنبد کاووس
    مقالات زیست شناسی
    زیست شناسی تنگستان
    من و دنیای زیست ام
    بیولوژی انیمیشن وتصاویر
    زیست شناسی رفسنجان
    آزمایشگاه خون شناسی از دبستان تا دانشگاه
    rap681
    زیست پژوهان جوان
    آزمایشگاه خون شناسی دانش آموزی
    دانشگاه مسجدسلیمان
    زیست شناسی کردستان
    مطالب پزشکی-اجتماعی
    زیست شناسی نوین
    وبلاگ تخصصی اتاق عمل
    شیلات آبادان
    فرزانگان حنوب
    علوم آزمایشگاهی
    بازتاب مسجدسلیمان
    بیوتکتولوژی و میکروب
    میکروبیولوژی لاهیجان
    میکروب ارومیه
    پایگاه علوم پایه پزشکی
    پایگاه علوم پایه پزشکی ایران
    انجمن علمی علوم جانوری همدان
    ریاضیات بی نهایت آسان و سریع
    وبلاگ میکروب و بیوتکنولوِژی
    بیماری شناسی گیاهی
    اخلاق پزشکی
    دانشمندان جوان
    دانشجوی میکروبیولوژی ارومیه
    وت پارس
    پرستاران بادرود
    مهندسی پزشکی
    میکروبیولوژی
    آفتاب مهتاب
    کشاورزی نوین دلفان
    مطالب جالب و خواندنی
     

     RSS

    POWERED BY
    BLOGFA.COM